Detecção do Grapevine virus A e Grapevine virus B por hibridização dot-blot com sondas moleculares não radioativas
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Data de Publicação: | 2005 |
Outros Autores: | , |
Tipo de documento: | Artigo |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNESP |
Texto Completo: | http://dx.doi.org/10.1590/S0100-41582005000500015 http://hdl.handle.net/11449/22511 |
Resumo: | O vírus A da videira (Grapevine virus A, GVA) e o vírus B da videira (Grapevirus virus B, GVB) estão associados à acanaladura do lenho de Kober (Kober stem grooving) e ao fendilhamento cortical da videira (grapevine corky bark), respectivamente. Este trabalho descreve o uso de sondas moleculares de cDNA na detecção de isolados do GVA (GVA-SP) e do GVB (GVB-C-SP e GVB-I-SP) em videiras (Vitis spp.) e fumo (Nicotiana occidentalis). As sondas marcadas com digoxigenina foram produzidas por RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos para os genes da proteína capsidial. Os RNA totais foram extraídos de 45 plantas de diversas variedades de videira e de 13 plantas de fumo inoculadas mecanicamente com o GVB. Os RNA extraídos das plantas infetadas, indexadas biologicamente, hibridizaram com as sondas, não se verificando reação com plantas sadias. Para confirmar os resultados de hibridização, foram também feitos testes de RT-PCR. A utilização de hibridização dot-blot com sondas de cDNA mostrou-se eficaz na detecção dos vírus com especificidade e sensibilidade, ressaltando-se que, preferencialmente, folhas maduras e ramos dormentes devem ser utilizados nos testes diagnósticos para o GVB e GVA, respectivamente. |
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Detecção do Grapevine virus A e Grapevine virus B por hibridização dot-blot com sondas moleculares não radioativasDetection of Grapevine virus A and Grapevine virus B by dot blot hybridization with non-radioactive molecular probesVitisVitivirusfendilhamento cortical da videiragrapevine cork barkyacanaladura do lenho de KoberKober stem groovingVitisVitivirusstem groovinggrapevine cork barkyKober stem groovingO vírus A da videira (Grapevine virus A, GVA) e o vírus B da videira (Grapevirus virus B, GVB) estão associados à acanaladura do lenho de Kober (Kober stem grooving) e ao fendilhamento cortical da videira (grapevine corky bark), respectivamente. Este trabalho descreve o uso de sondas moleculares de cDNA na detecção de isolados do GVA (GVA-SP) e do GVB (GVB-C-SP e GVB-I-SP) em videiras (Vitis spp.) e fumo (Nicotiana occidentalis). As sondas marcadas com digoxigenina foram produzidas por RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos para os genes da proteína capsidial. Os RNA totais foram extraídos de 45 plantas de diversas variedades de videira e de 13 plantas de fumo inoculadas mecanicamente com o GVB. Os RNA extraídos das plantas infetadas, indexadas biologicamente, hibridizaram com as sondas, não se verificando reação com plantas sadias. Para confirmar os resultados de hibridização, foram também feitos testes de RT-PCR. A utilização de hibridização dot-blot com sondas de cDNA mostrou-se eficaz na detecção dos vírus com especificidade e sensibilidade, ressaltando-se que, preferencialmente, folhas maduras e ramos dormentes devem ser utilizados nos testes diagnósticos para o GVB e GVA, respectivamente.Grapevine virus A (GVA) and Grapevine virus B (GVB) are involved in the Kober stem grooving and grapevine corky bark diseases, respectively. This work reports the molecular detection of isolates of GVA (GVA-SP) and GVB (GVB-C-SP and GVB-I-SP) in grapevines (Vitis spp.) and tobacco (Nicotiana occidentalis) by non-radioactive molecular probes. The digoxigenin-labeled probes were generated by RT-PCR using specific primers to the coat protein genes. Total RNA was extracted from 45 plants of several grapevine varieties and from 13 plants of tobacco mechanically inoculated with GVB. The RNA extracted from infected plants, considered infected by biological indexing, reacted to the cDNA probes while there was no hybridization with healthy plants. These results were also confirmed by RT-PCR experiments. The use of the cDNA probes hybridization was proved to be efficient in detecting both GVA and GVB with high specificity and sensitivity. However, mature leaves and dormant cuttings should be preferably used in diagnostic tests of GVB and GVA, respectively.Universidade Estadual Paulista Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas Departamento de Zoologia e BotânicaIntituto Agronômico de Campinas Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de FitossanidadeUniversidade Estadual Paulista Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas Departamento de Zoologia e BotânicaSociedade Brasileira de FitopatologiaUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Intituto Agronômico de Campinas Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de FitossanidadeMoreira, Andreia E [UNESP]Gaspar, José O [UNESP]Kuniyuki, Hugo2014-05-20T14:04:04Z2014-05-20T14:04:04Z2005-10-01info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/article538-542application/pdfhttp://dx.doi.org/10.1590/S0100-41582005000500015Fitopatologia Brasileira. Sociedade Brasileira de Fitopatologia, v. 30, n. 5, p. 538-542, 2005.0100-4158http://hdl.handle.net/11449/2251110.1590/S0100-41582005000500015S0100-41582005000500015S0100-41582005000500015.pdfSciELOreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporFitopatologia Brasileirainfo:eu-repo/semantics/openAccess2023-10-13T06:06:37Zoai:repositorio.unesp.br:11449/22511Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T14:47:02.308278Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
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