Efeitos da estimulação sequencial e suplementação com neurorregulina durante a MIV sobre a progressão meiótica e a produção embrionária

• Autor(a) principal: Carneiro, Drielle dos Santos
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: https://hdl.handle.net/11449/251958
• topic: Maturação oocitária in vitro; AREG; NRG1; Vesícula germinativa; Produção embrionária; MIV; PIVE

A maturação in vitro (MIV) é uma técnica de reprodução assistida empregada na pecuária e na medicina reprodutiva. O uso de fatores intrafoliculares durante a MIV tem sido investigado para estimular e modular a cascata de maturação de maneira mais fisiológica e melhorar os resultados da produção embrionária. Esse estudo teve como objetivo aprimorar um sistema de maturação oocitária já estabelecido em nosso laboratório, o Sistema Folicular (SF), utilizando os indutores FSH e ampirregulina (AREG) de maneira sequencial (SFseq), para promover uma ativação mais fisiológica da cascata de maturação. Avaliou-se também a suplementação com neurorregulina (NRG1) na primeira etapa do SFseq, um EGF-like que atua modulando a ativação da cascata de maturação. Complexos cumulus-oócitos (COCs) obtidos de ovários de abatedouros foram submetidos a MIV durante 6, 9 e 22h para avaliar a maturação nuclear (experimento 1) ou durante 24h para a produção embrionária (experimento 2) com os tratamentos: FSH, SF, SFseq e SFseq+N. COCs alocados no grupo SFseq e SFseq+N foram primeiramente cultivados por 6h em meio sem adição de AREG e NRG1 (SFseq) ou somente sem adição de AREG (SFseq+N), seguido de cultivo em meio SF completo. No experimento 1, ao final dos períodos estipulados acima, os oócitos foram desnudos e corados com Hoechst para avaliar a progressão meiótica. No experimento 2, os COCs maturados foram submetidos à fertilização in vitro e cultivo in vitro. No terceiro dia do cultivo, a clivagem embrionária foi analisada e ao final de 7 dias de cultivo, a produção de blastocistos, o grau de desenvolvimento e número de células embrionárias foram analisados. Os dados foram comparados por ANOVA ou Kruskal-Wallis e as diferenças foram consideradas significativas quando P ≤ 0,05. Os resultados mostraram que a ativação sequencial (SFseq e SFseq+N) modulou a maturação nuclear nas primeiras 6 horas sem comprometer a progressão para metáfase II. Quanto à produção embrionária, a adição de NRG1 nas fases iniciais do tratamento SFseq reduziu a taxa de blastocisto. No entanto, não houve diferenças no número total de células nos blastocistos produzidos. Os dados indicam que a estratégia sequencial diminuiu a velocidade de maturação nuclear inicial, mas parece não beneficiar a aquisição de competência para o desenvolvimento embrionário no modelo proposto. A continuidade dos estudos, com maior número de réplicas experimentais, é importante para a confirmação desses resultados, considerando também a avaliação de variações no tempo de exposição aos tratamentos e do período total da maturação.