Análise in silico, expressão e purificação de uma nova lacase bacteriana de Chitinophaga sp. CB10

• Autor(a) principal: Buzzo, Bárbara Bonfá
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/181197
• topic: Multicopper oxidase; Corpúsculos de inclusão; Expressão

As enzimas são catalisadores biológicos que cada vez mais despertam o interesse da indústria em aplicá-las em seus processos. As lacases, uma classe de enzimas pertencente à família das “multicopper oxidases”, possuem alto potencial industrial pois atuam em diversos substratos, tendo assim, uma diversidade de aplicações. Dentre as lacases, as bacterianas são as de maior interesse para os processos industriais em comparação com as de fungos, uma vez que bactérias apresentam maior tolerância a ambientes extremos e apresentam um tempo de reprodução mais rápido. Diante disto, foi realizada a prospecção de uma lacase bacteriana no genoma de Chitinophaga sp. CB10 a partir do banco de dados genômico, pertencente ao Laboratório de Bioquímica de Microrganismos e Plantas (LBMP), com base em genes ortólogos e busca por HMM (“Hidden Markov Model”) seguida pela busca de lacases utilizando como sequência isca o padrão conversado L3 (HLHGH), que é uma assinatura específica de lacases. Esta prospecção revelou uma ORF CB10_180.4889 a qual foi clonada e submetida às análises de expressão, extração e purificação. A proteína se mostrou retida em corpúsculos de inclusão e só foi possível extraí-la em sua fração solúvel utilizando agentes desnaturantes, como ureia e guanidina. Após a extração, a proteína desnaturada foi submetida a uma purificação concomitantemente a renaturação, que se mostrou eficiente de acordo com os testes de visualização de degradação de corante. A partir das análises “in silico”, observou-se que a enzima CB10_180.4889 possui três domínios de cobre (cupredoxina) e pertence à classe das CopAs, classe em que se encontram somente proteínas bacterianas com maior resistência ao cobre. Considerando a possível aplicação biotecnológica, a enzima apresentou potencial para a degradação de corantes.