Avaliação in vitro da ação de enzimas oriundas das NETs na replicação viral do hRSV

• Main Author: Lopes, Bruno Rafael Pereira
• Publication Date: 2021
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UNESP
• Download full: http://hdl.handle.net/11449/204322
• topic: hRSV; Armadilhas extracelulares neutrofílicas; Antiviral; Neutrophil extracellular traps; Antiviral

As infecções do trato respiratório são extremamente comuns sendo, o Vírus Sincicial Respiratório Humano (hRSV) o principal agente etiológico das infecções virais agudas do trato respiratório inferior, resultando mundialmente em mais de 3 milhões de casos muito graves de bronquiolite por ano. A infecção promove o influxo de células imunes populando o tecido predominantemente com neutrófilos. Estimulado pelo epitélio infectado e por proteínas virais, os neutrófilos secretam seu material genético imiscuído com enzimas granulares que formam as armadilhas extracelulares neutrofílicas (NETs). Essas estruturas possuem ampla atividade microbicida, porém apresentam grande potencial citotóxico, sendo comumente associadas a grande parte do dano tecidual, com consequente agravamento do quadro clínico. Pacientes infectados com hRSV apresentam grande quantidade de neutrófilos e elevado nível de enzimas neutrofílicas nas secreções do trato respiratório, entretanto pouco se sabe sobre a capacidade anti-hRSV dessas proteínas. Intuindo contribuir na elucidação do papel das NETs na infecção por hRSV, propôs-se avaliar o efeito de algumas enzimas sobre a replicação do hRSV in vitro. Para tanto, o efeito da replicação do hRSV, isoladamente ou na presença de diversas concentrações de enzimas das NETs (Mieloperoxidase, Proteínase 3, Catepsina G e Elastase) foi caraterizado e quantificado através de análises morfológicas, ensaios de viabilidade utilizando células HEp-2, perfil eletroforético e ensaios de redução de placas de lise. A presença de Proteinase 3, Catepsina G e Elastase reduziu a morte celular e a formação de placas de lise induzidas pela infecção, bem como a formação de sincícios, uma característica da replicação in vitro. O perfil eletroforético sugere que a proteína F viral, envolvida nos processos de adesão e fusão, interage com estas enzimas gerando pesados complexos ou mesmo clivagem da proteína viral. O conjunto dos resultados, associado ao descrito na literatura, indica que as enzimas das NETs possuem relevante efeito anti-hRSV, provavelmente via interação com as proteínas de superfície do vírion, como a proteína de fusão F.