Avaliação de compostos polifenólicos da Laguncularia racemosa sobre a atividade enzimática e farmacológica de serino proteases de Crotalus durissus terrificus.

• Autor(a) principal: Costa, Caroline Ramos da Cruz
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/153268
• topic: Cdtsp2 serina protease;; Crotalus durissus terrificus (Cdt);; secretória PLA2 (sPLA2); Edema; Inflamação; Estresse oxidativo; Receptor ativado por protease; MDA; COX-2; Cdtsp2 serine protease; Crotalus durissus terrificus (Cdt);; secretory PLA2 (sPLA2);; Edema; Inflammation; Oxidative stress; Protease activated receptor; COX-2; MDA

A giroxina é a principal serino protease encontrada no veneno total de Crotalus durissus terrificus. As serino proteases de veneno de serpentes são proteínas que apresentam uma grande similaridade estrutural com a trombina humana incluindo a alta conservação do sitio catalítico. Os resμltados já obtidos pelo nosso grupo revelaram a capacidade dos flavonoides glicosilados de Laguncularia racemosa em reduzir de forma significativa a atividade enzimática das trombinas humanas. A identificação destas molécμlas revelou que dois flavonoides glicosilados (quercetina-3-O-arabinosidio (QAra) e quercetina-3-O-ramnosidio (QRham)) respondem pela inibição da trombina (Rodrigues et al., 2015). Sabe-se que a soroterapia antiveneno não consegue neutralizar de forma eficiente a ação farmacológica das serino proteases e consequentemente não é capaz de neutralizar os danos homeostáticos e teciduais. Neste trabalho, uma nova serino protease foi isolada do veneno total de Crotalus durissus terrificus (cdtsp-2) através de quatro estapas de separação, usando a superdex 75 com uma fase móvel de bicarbonato de amônia pH 8, a cdtsp-2 Estas duas frações foram então fracionadas em coluna de troca iônica em DEAE para separação das principais frações e posteriormente fracionadas em CLAE de fase reversa para confirmar o grau de homologia molecular e em todas as etapas cromatográfica foram acompanhadas pelos ensaios enzimáticos em BApNA. A nova serino protease denominada como Cdtsp-2 (Crotalus durissus terrificus serino protease 2) é uma proteína inédita, .tem massa molecular de 27 kDa e sua sequência N-terminal mostrou diferenças estruturais quando comparada a giroxina de Crotalus durissus terrificus e os resultados mostram que a Crotalus durissus terrificus possui uma concentração relativa de serino proteases maior do que a sugerida na literatura. As atividades edematogênicas e miotoxicas foram padronizadas e comparadas com grupos tratados com QAra, QRham, inibidores de PKC, PLCs, Dexametasona e antagonistas para receptores ativados por protease (PAR) e solução salina (controle negativo). Durante o edema e os testes miotoxicos também detectamos de malondealdeído, PGE2 e COX-2. Nossos resultados mostraram que o edema induzido por Cdtsp2 não pode ser inibido pelos flavonóides de Laguncμlaria racemosa e envolve níveis significativamente aumentados de peroxidação lipídica e metabolismo do ácido araquidônico e ambos foram significativamente diminuídos pelo antagonista de PAR, PKC e inibidor de PLC e praticamente abolidos na presença de Dexametasona. Conclusão: nossos resultados mostraram que as atividades farmacológicas induzidas por Cdtsp2 envolvem presença de antagonistas de PAR 1, 2, ativação de PLC, PKC para mobilização de ácido araquidônico e aumento do estresse oxidativo.