Avaliação da modulação da atividade de macrófagos por infecção de Cryptococcus gattii e Cryptococcus neoformans : alterações na via de sinalização mTOR

• Autor(a) principal: Piffer, Alicia Corbellini
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/180228
• topic: Cryptococcus gattii; Cryptococcus neoformans; Criptococose

Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são os agentes etiológicos da criptococcose, micose sistêmica que afeta principalmente os pulmões e o sistema nervoso central. O processo infeccioso inicia com a inalação de células de criptococcus e deposição nos alvéolos pulmonares, onde uma complexa interação com macrófagos inicia. Esta interação normalmente resulta na inibição da função de macrófagos podendo acarretar em apoptose das células de defesa. Sendo assim, o objetivo deste trabalho é avaliar vias e genes em macrófagos afetados pela infecção por C. neoformans e C. gattii. Para isso, foi realizada uma análise transcricional comparativa para avaliar mudanças em macrófagos expostos a C. neoformans e C. gattii. Macrófagos pré-ativados da linhagem J774.A1 foram infectados com C. neoformans linhagem H99 e C. gattii linhagem R265 por 6 horas. O RNA poli-adenilado destes macrófagos foi purificado e submetido a sequenciamento no sistema Ion PGM, no qual foi detectada a expressão alterada em cerca de 40 genes de J774.A1 pela presença de ambas leveduras. Esses genes diferencialmente expressos foram usados como dados de entrada no programa String 10, gerando duas diferentes redes com mais 700 proteínas. Essas redes foram analisadas no programa Cytoscape 2.8.3 e observamos que a maioria dos bioprocessos que apresentavam pelo menos um gene diferencialmente expresso estavam relacionadas com a via Akt/mTOR. Para a confirmação dos dados de RNAseq, nós realizamos qRT-PCRs dos genes dos macrófagos envolvidos com esta via. Todos os genes apresentaram redução da expressão após 24 horas de interação com as células fúngicas. Também realizamos análises de Western blot para avaliar a expressão de Akt total, S6K total e fosforilada e GSK-3β fosforilada em macrófagos pré-ativados J774.A1 após a incubação com as linhagens fúngicas. Observamos uma diminuição nos níveis de S6k e GSK-3β fosforiladas após 24 horas de interação sugerindo que o mTORC1 apresenta uma menor atividade em macrófagos infectados com C. neoformans e C. gattii. Nossos resultados indicam que C. neoformans e C. gattii conseguem explorar a modulação de várias vias para potencialmente reduzir a atividade antifúngica destas células, uma vez que essa via está envolvida em processos chaves da resposta imune.