Estudo piloto clínico experimental de coleta e armazenamento de material de carcinoma pulmonar para utilização em pesquisa biomédica

• Autor(a) principal: García, Rita María González
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/214008
• topic: Neoplasias pulmonares; Carcinoma pulmonar de células não pequenas; Anticorpos; Lung neoplasms; Non-small cell carcinoma; Immunology; Antibodies

A conservação do patrimônio genético trouxe a necessidade de novas formas de diagnóstico e tratamento do câncer de pulmão, pelo qual faz-se necessário a coleta e conservação de tecidos frescos, com uma maior qualidade, e que permitam o estudo dos fenômenos moleculares desta patologia. Objetivo: Estabelecer um mecanismo estrutural e organizacional para a coleta, preservação, armazenamento, viabilidade e análise molecular de amostras de tecido tumoral pulmonar, tecido pulmonar adjacente saudável e sangue: provenientes de pacientes com diagnóstico de câncer de pulmão. Metodologia: O projeto foi realizado como um ensaio piloto clínico experimental longitudinal, prospectivo e não randomizado no qual o mesmo indivíduo é estudado em seu perfil genético e molecular através de diferentes amostras coletadas. A seleção da amostra foi feita por conveniência, não probabilística, não aleatória e intencional, em três protocolos com diferentes momentos de coleta, conservação e armazenamento, relacionados com a data da cirurgia e com diferentes criopreservantes e meios de cultura: protocolo 1: 200μl solução salina NaCl 0,9 % / 20μl soro fetal bovino e 200μl RNALater, protocolo 2:com 300μl PBS e 200μl RNALater, e protocolo 3: 4ml de RPMI 1640 e 200μl RNALater. Foram coletados a fresco 20ml de sangue periférico, duas amostras de tecido tumoral de pulmão, duas amostras de tecido adjacente de pulmão saudável, e linfonodo mediastinal dos pacientes estudados e criopreservadas a -80oC. Resultados: Os tumores coletados no estudo foram adenocarcinoma (69%), carcinoma indiferenciado (19%) e carcinoma epidermoide (12%), de um total de 16 pacientes. As amostras de sangue periférico foram conservadas como soro e plasma a -80oC, e realizada imunofenotipagem com citometria de fluxo em sangue periférico a fresco. Com as amostras de tumor, criopreservadas por onze meses em solução salina NaCl/SFB e RNALater, e por três meses em RPMI 1640 obtivemos linhagem celular com a dissociação celular do tecido tumoral demonstrando a viabilidade das amostras. A funcionalidade das amostras de tumor conservadas a fresco em RPMI 1640 demonstrou a presença de marcadores imunofenotípicos relacionados com a presença /ausência dos linfócitos T e B na citometria de fluxo. Não há crescimento da cultura celular em RPMI nas amostras de tumor transportadas no PBS dos 7 pacientes do protocolo 2. Conclusões: Um sistema com uma estrutura organizada foi desenvolvido e aperfeiçoado para a coleta, preservação e armazenamento de amostras de sangue, tecido pulmonar saudável, tecido tumoral pulmonar e linfonodal em pacientes com carcinoma pulmonar de células não pequenas. Demonstramos a viabilidade e funcionalidade das amostras de sangue periférico e tumor de pulmão com a presença dos marcadores imunofenotípicos como CD3, CD4, CD8, CD19, CD26, CD38, CD39 e CD69 ao realizar Imunotipagem com citometria de fluxo, relevantes na predição e prognóstico do câncer de pulmão.