Imobilização de beta-glicosidases em suportes de agarose ativada com diferentes grupos funcionais

• Autor(a) principal: Andrades, Diandra de
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/232664
• topic: Beta-glucosidase; Glutaral; Ensaios enzimáticos; Glucose; Tecnologia de alimentos

As β-glicosidases hidrolisam ligações β-glicosídicas a partir da extremidade não redutora de oligossacarídeos e glicosídeos conjugados, e possuem largo espectro de aplicações biotecnológicas como, na estabilização e enriquecimento de bebidas a exemplo dos sucos e vinhos. Porém, estes processos são realizados em um meio com alta concentração de glicose, uma molécula com grande efeito inibitório das β- glicosidases. Deste modo, o presente trabalho visou desenvolver biocatalisadores imobilizados com atividade de β-glicosidase, capazes de serem aplicados em bebidas à base de uva. A imobilização desta enzima é uma ferramenta extremamente relevante para ultrapassar os desafios da sua aplicação industrial através da melhoria das suas características, como, um melhor controle operacional, e menor oneração. Inicialmente, as atividades de β-glicosidase de nove preparações enzimáticas comerciais foram comparadas avaliando-se os efeitos do pH, estabilidade térmica, parâmetros cinéticos e tolerância à glicose. O valor do pH do meio de reação influenciou fortemente as atividades, estabilidades, e inibição à glicose das β- glicosidases testadas. As preparações de Pectinex Ultra SP-L, Pectinex Utra Clear e Celluclast® 1,5 L, e o extrato enzimático de Aspergillus niger URM 6642 foram selecionadas com base em sua atividade de β-glicosidase e tolerância à glicose. Em seguida, a imobilização das enzimas selecionadas foram testadas em 5 diferentes suportes: MANAE, MANAE-glutaraldeído, glioxil-agarose, divinilsulfona-agarose e epóxi-agarose. A imobilização das β-glicosidases de Pectinex Ultra SP-L, Pectinex Utra Clear e de A. niger URM 6642 no suporte MANAE-agarose foram realizadas em pH 5, 7 e 9 para permitir diferentes orientações das moléculas da enzima na superfície do suporte, e, posteriormente, também modificadas com glutaraldeído. Os resultados demonstraram que o protocolo ideal para imobilizações de β-glicosidases, usando a o glutaraldeído, deve ser testado individualmente e adaptado para cada tipo de enzima. A imobilização das β-glicosidases de Pectinex Ultra SP-L e Celluclast® 1.5L em DVS-agarose também foram testadas nos pHs 5, 7, 9 e 10. Os resultados demonstraram que o pH de imobilização ocasionou forte influência nos rendimentos de imobilização, e afetou a estabilidade das enzimas e a tolerância à glicose. As enzimas também foram estudadas quanto a descoloração do suco de uva e do vinho tinto. Os resultados deste trabalho demonstraram que os biocatalisadores estudados possuem características promissoras, e, portanto, de grande importância para indústria.