Efeitos da inibição de PTEN (Phosphatase and Tensin Homologue) em cultivo in vitro de tecido ovariano bovino sobre a ativação folicular inicial e qualidade tecidual

• Autor(a) principal: Silveira, Israel Nunes
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-15022024-102150/
• topic: Ativação folicular; Cultivo de tecido ovariano; Estroma ovariano; Follicular activation; Ovarian stroma; Ovarian tissue culture; PTEN; PTEN

Pacientes Oncológicas do sexo feminino, principalmente meninas pré-púberes e mulheres inaptas à estimulação ovariana, quando são submetidas à quimioterapia enfrentam a possibilidade de perder sua fertilidade devido à gonadotoxidade destas drogas. A criopreservação de tecido ovariano, seguida do cultivo de folículos ovarianos in vitro em sistema multistep, apesar de ainda experimental, parece ser a estratégia mais promissora para a obtenção de oócitos MII competentes, para futura utilização em técnicas de FIV. A ativação de folículos primordiais no tecido ovariano e seu crescimento aos estágios primário e secundário é o passo mais desafiador para a consolidação deste sistema uma vez que, em condições fisiológicas, esse processo leva meses nos mamíferos superiores. O processo de ativação dos folículos primordiais inativos do pool é um evento fisiológico ainda pouco elucidado, por isso a ativação folicular artificial é um grande desafio. A via de sinalização PI3K parece estar diretamente envolvida na ativação de folículos ovarianos primordiais. O uso de inibidores do PTEN, um regulador negativo fundamental da PI3K, parece promover ativação destes folículos in vitro, no entanto, com sucesso modesto com a continuação do crescimento e desenvolvimento, principalmente devido a impactos importantes na estrutura folicular e do estroma tecidual. Nosso estudo teve como objetivo expor o tecido do córtex ovariano bovino ao bpV(pic), um inibidor de PTEN em diferentes condições e avaliar seus efeitos nos folículos e no estroma ovariano. Fragmentos ovarianos foram cultivados com bpV(pic) a 1, 10 ou 100µM por 12, 24 e 48h (9 grupos tratados) e mantidos em cultivo até completar 7 dias. Um controle fresco e um controle cultivado foram comparados aos grupos tratados quanto ao (a) desenvolvimento folicular, através de classificação histomorfométrica, (b) ativação de PI3K, indicada pela extrusão nuclear do fator de transcrição Foxo3 pelo ensaio IHC, (c) apoptose folicular e (d) do estroma, por IHC de caspase-3 clivada e (e) quantificação de espessura de fibras colágenas por coloração de picrosírius red observada sob microscopia de luz polarizada. Nossos achados não mostraram diferença significativa na ativação da via PI3K ou na alteração das taxas de desenvolvimento folicular, no entanto, doses elevadas de bpV(pic) mostraram-se prejudiciais à sobrevivência folicular. Quando comparados ao controle cultivado, os fragmentos tratados com 100µM apresentaram até o dobro das taxas de apoptose nas células do estroma. O uso de doses intermediárias (10µM) do fármaco mostrou um efeito protetor às células do estroma. O ensaio de picrosirius red mostrou influência significativa da exposição prolongada, com importante redução da espessura das fibras colágenas, indicando desgaste na matriz extracelular em resposta ao fármaco. Há um efeito dose-dependente da exposição ao bpV (pic) na vitalidade folicular e no dano do estroma. Considerando uma possível atividade protetora tecidual em condições intermediárias de exposição ao inibidor de PTEN, a utilização desta molécula associada a outros ativadores de PI3K pode ser uma abordagem interessante para a concepção de uma primeira fase do sistema de cultivo multistep.