Efeitos da inibição da via PI3K/PTEN/Akt no recrutamento folicular após transplante de enxerto ovariano criopreservado

• Autor(a) principal: Lobel, Alexandre Likier Steinberg
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5139/tde-09032020-100028/
• topic: AS101; AS101; Ativação folicular; Fertility preservation; Follicular activation; Follicular reserve; Ovarian tissue transplantation; PI3K / PTEN / Akt Signaling; Preservação de fertilidade; Reserva folicular; Sinalização PI3K/PTEN/Akt; Transplante de tecido ovariano

Introdução: A sinalização PI3K/PTEN/Akt é associada à ativação prematura e depleção da coorte folicular após quimioterapia e na isquemia após o transplante de tecido ovariano criopreservado. Este estudo tem como objetivo avaliar a ativação e a inibição da via PI3K/PTEN/Akt após o transplante de enxerto ovariano criopreservado, empregando a substância AS101,que reduziria a taxa de recrutamento folicular, e poderia diminuir o dano tecidual. Métodos: Estudo experimental com enxerto ovariano bovino em camundongas imunossuprimidas, dividido em cinco etapas: 1) análise da via PI3k/PTEN/Akt na ativação de folicular em tecido fresco, utilizando imunofluorescência; 2) comparação da atividade da via PI3K/PTEN/Akt entre tecido ovariano fresco não transplantado e tecido ovariano congelado, descongelado e transplantado, com retirada após cinco dias pela técnica de Western Blot; 3) incubação de tecido descongelado em duas horas com e sem AS101 e comparação por Western Blot; 4) comparação de tecidos fresco e descongelado, com e sem AS101, recuperados em dois e cinco dias após o transplante, por Western Blot e imunofluorescência; 5) avaliar a quantidade e os tipos de folículos no tecido ovariano descongelado, com e sem tratamento com AS101, em amostras recuperadas após 14 dias do transplante, por histomorfometria. Para tais experimentos foi utilizado tecido ovariano bovino obtido de animais pré-púberes (14 dias de vida), isolado e criopreservado por congelamento lento; tecido descongelado avaliado in vitro e in vivo, com e sem exposição ao AS101, em cultivo tecidual por duas horas antes do transplante. Os enxertos foram transplantados para os músculos glúteos de camundongas imunodeprimidas ooforectomizadas; a ativação da sinalização de Akt foi medida no tecido antes do transplante e em vários intervalos após o transplante. Após o procedimento, efetuou-se a contagem de folículos primordiais e em crescimento, bem como o cálculo da taxa de recrutamento folicular. As variáveis quantitativas foram estatisticamente analisadas com uso de testes de Mann-Whitney ou teste t-Student dados. A existência de associação das características qualitativas entre os grupos foi analisada com os testes de qui-quadrado ou exato de Fisher. O nível de significância foi fixado com alfa de 5%. Resultados: Os folículos primordiais, em estágio de quiescência apresentam baixa ativação da via PI3K/PTEN/Akt enquanto os folículos em crescimento, tinham maior taxa de atividade. Houve hiperatividade da via PI3K/PTEN/Akt, após o congelamento e o descongelamento do enxerto. A ministração de AS101 durante o cultivo in vitro reduziu o grau de ativação de PI3K/PTEN/Akt pelas técnicas de Western blot e imunofluorescência antes e após o transplante. Concomitantemente, houve aumento da reserva folicular após duas semanas do transplante e queda da taxa de recrutamento folicular. Conclusões: Nossos achados sugerem que o AS101 foi eficaz em preservar a reserva folicular, pelo recrutamento de folículos primordiais e inibição da via PI3K/PTEN/Akt. Contudo, há a necessidade de mais estudos clínicos para comprovar sua eficácia no tecido ovariano de mulheres