Análise da atividade transcricional de HPV-18 durante a diferenciação celular

• Autor(a) principal: Ribeiro, Aline Lopes
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-19072022-161053/
• topic: Cell differentiation; Diferenciação celular; Estágios do ciclo de vida; Expressão gênica; Fatores de transcrição; Gene expression; Genes virais; Genes viral; Human papillomavirus 18; Keratinocytes; Life cycle stages; Papilomavírus humano 18; Queratinócitos; Transcrição viral; Transcription factors; Viral transcription

O ciclo de vida do papilomavírus humano (HPV) está intimamente ligado ao programa de diferenciação dos queratinócitos. O repertório de fatores de transcrição (FTs) expressos na célula hospedeira tem um papel crucial na coordenação da expressão gênica viral nas diferentes camadas do epitélio escamoso estratificado. Por sua vez, a expressão de oncogenes virais modifica o ambiente celular culminando, em última análise, na transformação tumorigênica da célula. O objetivo principal desse estudo foi investigar o papel de diferentes FTs durante o ciclo de vida viral, de modo a melhor elucidar as interações entre a célula hospedeira e o vírus. Inicialmente, comparamos o nível de 345 FTs em queratinócitos não diferenciados e diferenciados. Foram encontrados níveis diferenciais de 30 FTs. Em seguida, levando-se em consideração que os FTs capazes de se ligar diretamente à região longa de controle (LCR) têm uma influência potencialmente mais preponderante sobre a regulação da transcrição viral, procurou-se sítios de ligação putativos para os 30 FTs na LCR de HPV-18 utilizando ferramentas in sílico. Em seguida, a confirmação da ligação de FTs selecionados foi realizada com ensaios qPCR-ChIP. Assim, foi possível identificar a ligação de quatro FTs à LCR: HMGB1, PAX-6, FOXI1 e NF-E2. Prosseguiu-se com uma abordagem funcional que revelou que a co-transfecção transitória de cada um desses quatro FTs com um construto de pGL3-18LCR foi capaz de influenciar na atividade transcricional do promotor precoce do HPV-18 de maneira dose-dependente. Além disso, foi observada uma regulação diferencial desses FTs sobre a atividade do promotor de acordo com estado de diferenciação dos queratinócitos. Finalmente, foi demonstrado que a expressão das oncoproteínas do HPV-18 leva ao aumento dos níveis desses fatores. Além disso, a expressão dos FTs se mostrou variável de acordo com a transformação celular. Portanto, identificou-se quatro novos FTs celulares que podem ser potencialmente relevantes para a regulação da transcrição do HPV durante a diferenciação e transformação maligna. Expandir esse conhecimento contribui para melhor compreender a biologia e a patogênese das doenças associadas ao HPV-18