Caracterização e avaliação da atividade enzimática da toxina tetânica submetida à radiação gama por Cobalto 60

• Autor(a) principal: Damião, Giselle Pacifico Sartori
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/99/99131/tde-03102019-145053/
• topic: Clostridium tetani; Clostridium tetani; Gamma Radiation; Protein - Structure; Proteínas - Estrutura; Radiação Gama; Tétano; Tetanus; Toxinas; Toxins

O tétano é uma doença aguda de alta letalidade que acomete os terminais nervosos impedindo a liberação de neurotransmissores inibitórios. Considerada uma das toxinas microbianas mais potentes, o tétano ainda é um grave problema de saúde pública em países subdesenvolvidos e sua principal forma de prevenção se dá através da imunização. A vacina antitetânica é produzida a partir da inativação da TeNT por formaldeído e pode causar diversos efeitos adversos. Uma alternativa atualmente estudada é o uso da radiação ionizante para a diminuição da toxicidade de proteínas melhorando sua capacidade imunogênica e reduzindo reações adversas pós-vacinais. A partir disso, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar o efeito da radiação ionizante na estrutura da toxina tetânica submetida a diferentes doses de radiação gama por Cobalto 60 e analisar a atividade enzimática residual após a exposição à radiação. A modificação estrutural na toxina tetânica após a radiação foi determinada por SDS PAGE, que evidenciou uma modificação gradual no perfil das proteínas com perda no volume da banda conforme o aumento da dose e o surgimento de bandas a partir da dose de 5 kGy. A análise por MALDI-TOF demonstrou fragmentações nas massas moleculares conforme o aumento da dose e possíveis agregações de fragmentos proteicos em doses mais elevadas. Na análise da preservação dos peptídeos por digestão enzimática e espectrometria de massa, houve uma discreta modificação no reconhecimento até a dose de 4 kGy, nas doses subsequentes, o reconhecimento foi mínimo. A análise da atividade enzimática residual por fluorescência demonstrou preservação de 65% da atividade mesmo em doses mais elevadas. Na avaliação antigênica realizada por ELISA e Western Blot, foi possível observar o reconhecimento de anticorpos anti-TeNT frente às toxinas irradiadas nas diferentes doses, com queda gradual conforme o aumento da dose, mas permanecendo com níveis satisfatórios em todas as doses. Nossos dados sugerem que a radiação ionizante promoveu alterações estruturais na toxina tetânica, promovendo fragmentação e/ou agregação com o aumento da dose, porém também foi possível observar que a radiação atenuou a atividade enzimática e que seu reconhecimento antigênico mesmo em doses mais elevadas permaneceu com bons níveis o que indica a possibilidade de um possível uso como imunógeno, contudo, estudos da atividade enzimática sobre doses mais elevadas necessitam serem realizados.