Expressão do ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva  em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2)

• Autor(a) principal: Barbosa, Flávia Ferreira
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13112019-105906/
• topic: Células S2; Ectodomain; Ectodomínio; Glicoproteína; Glycoprotein; Lissavírus da Raiva; Rabies Lissavirus; S2 cells

A raiva é uma doença tropical negligenciada (DTN) que acomete humanos, mamíferos silvestres e domésticos, cuja taxa de mortalidade mundial atinge aproximadamente 60.000 mortes humanas ao ano, o que a caracteriza como um sério problema de saúde pública, representando um grande impacto em populações mais vulneráveis, devido, principalmente, a fácil propagação de seu agente. O Lissavírus da raiva (RABV) sintetiza uma molécula glicoproteica, a RVGP (do inglês Rabies Lissavirus Glycoprotein), cuja porção exposta na superfície da membrana do vírus (chamada ectodomínio) tem função mediadora na adesão à célula hospedeira e na indução de anticorpos neutralizantes. Um controle efetivo frente a esta DTN pode ser alcançado quando abordagens em saúde pública são trabalhadas desenvolvendo, por exemplo, vacinas preventivas. Apesar do investimento, o controle da doença não tem sido o suficiente para conter sua distribuição. Desta forma, este projeto teve por objetivo otimizar a produção da molécula RVGP a partir do uso de sua porção antigênica, o ectodomínio, obtendo assim uma proteína heteróloga secretada. Para isso, foi utilizado um sistema de expressão de proteínas recombinantes baseado em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2 - S2), capaz de sintetizar de forma indutível esta molécula com possibilidade de desempenhar sua função biológica, contendo os epítopos antigênicos do lissavírus da raiva. A linhagem celular obtida através de transfecção com o agente Lipofectamine® 2000 foi denominada S2MTBip_RVGP-ecto e expressa o ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva de forma secretada em diferentes condições de indução e tempos de coleta. A proteína foi detectada por análises de Dot blotting, Western blotting e quantificada por ELISA. Os resultados mostram a presença de uma banda correspondente a massa molecular de aproximadamente 51 kDa, presentes no sobrenadante das culturas, reconhecida por anticorpos monoclonais (C75 e D1) e soro. A subclonagem da população inicial de S2MTBip_RVGP-ecto permitiram a seleção de uma subpopulação recombinante (S2MTBip_RVGP-ectoG5), capaz de produzir mais rRVGP-ecto, sugerindo que os valores obtidos da proteína recombinante ainda podem ser melhorados.