Triagem e caracterização de antígenos de Paracoccidioides spp. e Histoplasma capsulatum para o desenvolvimento de ferramenta terapêutica baseada em anticorpos monoclonais e quiméricos

• Autor(a) principal: Moura, Ágata Nogueira D\'Áurea
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5133/tde-25082021-121748/
• topic: Chaperonin 60; Chaperonina 60; Chimera; Edição de genes; Engenharia genética; Gene editing; Genetic engineering; Histoplasma; Histoplasma, Proteomics; Histoplasmose; Histoplasmosis; Immunotherapy; Imunoterapia; Paracoccidioides; Paracoccidioides; Paracoccidioidomicose; Paracoccidioidomycosis; Proteômica; Quimera

Dentre as micoses sistêmicas de maior importância causadas por fungos termodimórficos destacam-se a Paracoccidioidomicose e a Histoplasmose, prevalentes nas Américas. As infecções fúngicas sistêmicas requerem tratamento de longo prazo, e têm sido associadas ao surgimento de novas espécies de microrganismos patogênicos e à progressão da morbimortalidade. Esses fatores são agravados pelo aumento no número de pacientes imunocomprometidos, da resistência fúngica aos medicamentos usuais, e da devastação da natureza. Neste estudo foram desenvolvidas ferramentas visando novas abordagens imunoterapêuticas. Foram utilizadas diferentes estratégias de manipulação genética como a construção de vetores para vacina de DNA, a síntese de Anticorpos Monoclonais Quiméricos e o design de um sistema de edição gênica baseado na técnica de CRISPR/Cas9. A triagem de antígenos de Paracoccidioides spp., discutida no primeiro capítulo, permitiu a identificação das proteínas Histona H2B e Carreadora de ADP/ATP na superfície das células leveduriformes como possíveis novos alvos vacinais. No segundo capítulo mostramos o potencial do anticorpo monoclonal quimérico 4E12 para modificar o curso da Histoplamose experimental, reduzindo a carga fúngica em pulmões e baços de camundongos. A quimera também aumentou a fagocitose in vitro de leveduras de H. capsulatum e de Paracoccidioides lutzii. No capítulo três discutimos a eficiência da transferência e do direcionamento alvo-específico (sequência obtida do gene para HSP60) da endonuclease Cas9, mediados por Agrobacterium tumefaciens, para leveduras de H. capsulatum, resultando em sucesso do método aplicado. O estudo mostra a importância da utilização das tecnologias de genômica e proteômica de forma integrada para o rastreamento de alvos antigênicos e para o desenvolvimento de novas terapias, podendo contribuir para um aprimoramento na compreensão dos mecanismos imunológicos envolvidos na relação patógeno-hospedeiro e para a elucidação do papel de antígenos na virulência e patogênese por meio de estudos de perda de função gênica