Avaliação do potencial terapêutico das células c-kit+lin- derivadas do tecido renal de ratos no tratamento da doença renal crônica experimental

• Autor(a) principal: Souza, Felipe Lima de
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5160/tde-29052023-150803/
• topic: Cell therapy; Células-tronco mesenquimais; Fator de células-tronco; Insuficiência renal crônica; Mesenchymal stem cells; Nefrectomia; Nephrectomy; Renal insufficiency chronic; Stem cell factor; Terapia celular

Diversos estudos em modelos experimentais de doença renal crônica (DRC) evidenciaram efeito renoprotetor usando células-tronco mesenquimais (MSC) extraídas de tecidos extra renais. Por outro lado, nós demonstramos pela primeira vez na literatura, que células c-kit+Lin- isoladas de rim de ratos em desenvolvimento (neonatos) exibem propriedades de células-tronco e capacidade regenerativa, verificadas após uma lesão renal aguda do tipo isquemia e reperfusão. Adicionalmente, nosso estudo recente em modelo de glomerulonefrite aguda induzido por puromicina também evidenciou que as células c-kit+Lin- contribuem para o reparo do citoesqueleto podocitário. Embora nossos estudos tenham mostrado a melhora em modelos de doença aguda e em glomerulopatia seu potencial regenerativo ainda não foi testado para doença renal crônica. Sendo assim, o objetivo principal do presente estudo é testar de forma pioneira a capacidade regenerativa das células c-kit+Lin- isoladas de rim de ratos neonatos e compará-las com as células tronco mesenquimais para o tratamento da doença renal crônica no modelo experimental de nefrectomia 5/6. Após aprovação no CEUA (n 945/17), foram usados 40 ratos Wistar machos (6 a 8 semanas de idade, peso 240-280g) e randomizados em quatro grupos com n=10 em cada: (1) sham, (2) Nx, (3) Nx+MSC, (4) Nx+C-KIT. Os grupos tratados receberam 1×10 células por via subcapsular 15 dias após a nefrectomia (fase de doença já estabelecida). Todos os animais foram submetidos à medição de pressão arterial caudal (PAC) e coleta de urina de 24 horas. No 15 dia após inoculação das células, todos os animais foram eutanasiados para coleta de sangue e realização de imunohistoquímica e imunofluorescência e análise histológica e morfológica. Nossos resultados demonstraram uma elevação das escórias nitrogenadas (média de creatinina = 0,73 vs 0,44 mg/dL e uréia=124 vs 59 mg/dL), da PAC (205 vs 143 mmHg), e da proteinúria (235 vs 18 mg/24hs) e albuminúria (5,4 vs 0,5 mg/24hs) mostrando que os animais desenvolveram DRC em todos os grupos submetidos à Nx quando comparados ao sham. Notadamente, apenas o grupo Nx+MSC foi capaz de reduzir a PAC (-32%). Entretanto, ambos os grupos tratados apresentaram melhora significativa da proteinúria (~60%) e da albuminúria (~70%). Digno de nota, houve redução intensa de proliferação celular (PCNA) após uso das MSC sendo que o tratamento com as c-kit+Lin- praticamente não levou a mudança no padrão de proliferação celular. Em relação a inflamação , observamos um aumento (~50%) de CD43 no grupo Nx, e o tratamento com MSC bloqueou quase completamente a sua expressão. Já o grupo Ckit também reduziu a expressão de CD43, porém em menor proporção do que o grupo NX+MSC. Similarmente, a expressão de linfócitos T aumentou no grupo Nx, e praticamente foi bloqueada com uso de MSC e inalterada com o uso das c-kit+Lin-. Na avaliação dos mac,rófagos nos diferentes grupos, foi observado que no grupo Nx houve aumento global e significativo das populações de M1 e M2, e somente o tratamento com células MSC diminuíram a expressão dos macrófagos a níveis normais e semelhante ao grupo sham. Em contrapartida, o grupo Ckit apresentou um aumento bastante significativo de de 1,5x de marcação em relação aos os animais com DRC, tanto na expressão de M1 quanto M2. Especificamente, é importante ressaltar que a quantidade de marcação para M2 exibiu um aumento maior nos animais tratados com células c-kit+Lin- revelando que estas células também agem de forma anti-inflamatória modulando a resposta inata. Chama a nossa atenção em relação ao evento de fibrose intersticial que após 30 dias da indução da DRC, ambos os tratamentos apresentaram similarmente menor grau de fibrose intersticial (~50%) pelo Tricrômico de Masson comparado ao grupo não tratado. Para finalizar, houve aumento da glomeruesclerose global e segmentar em todos os animais submetidos ao procedimento de Nx e ambos os tratamentos não mostraram melhora deste parâmetro. Visto em conjunto, chegamos à conclusão que nossos resultados sugerem pela primeira vez que as células ckit+Lin- tecido específica renal podem ser usadas como uma nova alternativa terapêutica para diminuição da progressão da DRC em modelo experimental. Futuros experimentos e estudos pré-clínicos usando as células ckit+Lin- são necessários para explorar e entender melhor os mecanismos de ação destas células