Padronização de sistemas de dupla amplificação para a detecção de DNA de Bartonella henselae em casos suspeitos de Bartonelose humana

• Autor(a) principal: Kawasato, Karina Hatamoto
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5141/tde-08032010-155348/
• topic: Bartonella henselae; Bartonella henselae; Bartonella infections/diagnostic; DNA; DNA; Infecções por Bartonella/diagnóstico; Polymerase chain reaction/methods; Reação em cadeia da polimerase/métodos

Bartoneloses são infecções causadas por Bartonella spp e constituem zoonoses de importância crescente devido à gravidade da infecção em pacientes imunodeficientes. Existem muitas síndromes clínicas associadas às bartoneloses, desde quadros típicos de doença da arranhadura do gato até lesões cutâneas linfoproliferativas (angiomatose bacilar), ou granulomatosas em órgãos (peliose bacilar), passando por quadros neurológicos, oculares, endocardites e febre prolongada. O diagnóstico laboratorial deveria ser baseado em isolamento da bactéria em cultura, resultados de sorologias e exames imunohistoquímicos, porém estas técnicas não se encontram disponíveis em nosso meio. A Reação da Cadeia da Polimerase (PCR) tem sido utilizada para aprimorar o diagnóstico das bartoneloses, e o presente estudo teve como objetivo padronizar três sistemas de dupla amplificação para detecção de DNA de Bartonella henselae em amostras biológicas de pacientes com suspeita de bartonelose e determinar dentre os sistemas de dupla amplificação (nested-PCR), aquele com melhor desempenho. Os nested-PCR empregaram oligonucleotídeosiniciadores das sequências ITS, HSP e FtsZ da Bartonella spp. Foram incluídos 19 pacientes, sendo 14 crianças/adolescentes e cinco adultos, tendo oito deles referido contato com gatos. Dos pacientes, 10 não tinham doenças de base, e nove apresentavam doença de base (três evoluíram a óbito). Foram coletadas 25 amostras: 14 de sangue periférico, sete biópsias de gânglios, duas punções de gânglios e duas biópsias de pele. Do total de 19 pacientes, 14 tiveram resultados positivos por PCR, e considerando as 25 amostras, 18 foram positivas por PCR (nove amostras de sangue, cinco biópsias de gânglios, duas punções de gânglios e duas biópsias de pele). Dez das 18 amostras positivas por PCR só foram detectadas pelo nested-FtsZ (seis amostras de sangue periférico, duas punções de gânglios, uma biópsia de gânglio e uma biópsia de pele). A primeira amplificação do sistema HSP-PCR detectou uma amostra positiva em 25 (1/25 ou 4%), e após o nested-HSP este percentual foi de 24% (6/25). Na primeira amplificação do sistema ITS-PCR a positividade foi de 20% (5/25), e no nested-ITS 32% (8/25). Após a primeira amplificação do sistema FtsZ-PCR a positividade foi de 16% (4/25), e no nested-FtsZ foi de 72% (18/25). O teste de McNemar testou a concordância ou discordância dos resultados obtidos pelos três sistemas de nested-PCR e revelou que os mesmos foram discordantes, com superioridade do sistema nested-FtsZ em relação aos outros dois nested-PCR, sendo a diferença estatisticamente significante (p<0,05). Os resultados do presente estudo permitiram concluir que o nested-FtsZ apresentou vantagens para o diagnóstico das bartoneloses em relação aos outros sistemas testados, em materiais biológicos previamentedescritos na literatura (biópsias e punções de gânglios), e até mesmo em sangue periférico de pacientes sem doença de base. Além disso, foi possível determinar, no presente estudo, que as infecções foram causadas por B. henselae, uma vez que não houve nenhuma PCR positiva pelos outros dois sistemas que não tenha sido detectada pelo nested-FstZ, e este amplifica apenas DNA de Bartonella henselae após a segunda amplificação.