Análise do potencial patogênico, diversidade genotípica e perfil de resistência de linhagens de Shigella flexneri isoladas por 34 anos em diferentes Estados do Brasil

• Autor(a) principal: Gonzales, Júlia Cunha
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-18052022-090320/
• topic: Antimicrobial resistance; Ensaios in vitro e in vivo de virulência; Genes de virulência; In vitro and in vivo virulence assays; Molecular typing; Resistência a antimicrobianos; Shigella flexneri; Shigella flexneri; Tipagem molecular; Virulence genes

A shigelose ou disenteria bacilar é causada por bactérias do gênero Shigella spp., e é um grave problema de saúde pública em vários locais do mundo. Em países em desenvolvimento como o Brasil, a shigelose é causada principalmente pela espécie Shigella flexneri. No entanto, existem relativamente poucos estudos que caracterizaram molecularmente linhagens de S. flexneri isoladas no país. O objetivo desse estudo foi caracterizar molecularmente e fenotipicamente 130 linhagens de S. flexneri isoladas de fezes de humanos com gastroenterite, entre os anos de 1983 a 2017 em diferentes Estados do Brasil. A pesquisa do potencial patogênico das linhagens de S. flexneri estudadas foi realizada pela pesquisa de 16 importantes genes de virulência por PCR convencional para as 130 linhagens de S. flexneri; pela capacidade de 50 linhagens selecionadas de invadir e sobreviver em células epiteliais do intestino humano (Caco-2), bem como sobreviver e se multiplicar em macrófagos de humanos (U-937). Adicionalmente, foi realizada a avaliação da virulência de 8 linhagens selecionadas de S. flexneri em Galleria mellonella. O perfil de resistência antimicrobiana foi obtido pela técnica de disco difusão para todas as linhagens. A caracterização da diversidade genotípica das 130 linhagens foi verificada por Enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR (ERIC-PCR), Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) e Multi-locus Sequence Typing (MLST). Uma alta frequência de alguns genes de virulência foi observada, o gene ipaH foi encontrado em todas as linhagens; os genes ial, sigA, iuc, virA e pic foram encontrados em mais de 70% das linhagens. Os genes sat e virF foram encontrados em 48,5% e 57,7% das linhagens, respectivamente. Os genes ipgD, icsA, virB, sepA, set1B, set1A e sen foram encontrados em menos de 40% das linhagens estudadas. A porcentagem de invasão em células Caco-2 foi ≥ 40% e a sobrevivência em U-937 foi ≥ 60% para as linhagens de S. flexneri analisadas. Sete das oito linhagens de S. flexneri estudadas causaram a morte de mais de 50% das larvas de Galleria mellonella após 10 dias de experimento. Um total de 57 (43,8%) linhagens foram multidroga resistentes (MDR). Por ERIC-PCR um total de 96 (73,8%) linhagens foram agrupadas em um único grupo com ≥ 70,4% de similaridade genética e especificamente 75 dessas linhagens apresentaram similaridade genética ≥ 80,9%. Por PFGE um total de 120 (92,3%) linhagens foram agrupadas em um único grupo com 57,4% de similaridade genética, e, especificamente 82 dessas linhagens apresentaram similaridade genética ≥ 70,6%. Todas as linhagens foram tipadas como ST245 por MLST. Em conclusão, a alta frequência de importantes genes de virulência, a grande porcentagem de invasão e sobrevivência das linhagens em células Caco-2 e em U-937 e a alta mortalidade de larvas de Galleria mellonella evidenciaram o potencial patogênico das linhagens de S. flexneri estudadas. As altas taxas de linhagens MDR são alarmantes, pois podem levar a ineficácia terapêutica quando o tratamento é necessário. Os resultados de ERIC-PCR, PFGE e MLST sugeriram a presença de linhagens descendentes de um subtipo prevalente de S. flexneri circulando em diferentes Estados do Brasil.