Análise funcional de peptídeos AtRALFs foliares e purificação por afinidade de proteínas que interagem com o AtRALF1 in planta

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ribeiro, Bianca
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-30042014-111146/
Resumo: Peptídeos sinais são moléculas envolvidas no crescimento, desenvolvimento e defesa de plantas. RALF (Rapid Alkalinization Factor) é um peptídeo sinal ubíquo no reino vegetal e que está envolvido com a expansão celular. Peptídeos RALF em Arabidopsis estão organizados em uma família multigênica de 37 membros, alguns com expressão tecido-específica, outros expressos em toda a planta. Este trabalho se insere dentro de um projeto maior que tem por objetivo esclarecer a função dos peptídeos RALF em plantas e determinar seu mecanismo de ação. Este trabalho teve dois objetivos específicos distintos. O primeiro consistiu em caracterizar as isoformas AtRALF19, AtRALF23, AtRALF31, AtRALF33 e AtRALF34 utilizando-se plantas mutantes, plantas superexpressoras e a análise dos promotores. O segundo objetivo específico foi identificar proteínas que interagem com o peptídeo AtRALF1 com o uso da técnica de purificação por afinidade em tandem (TAP) in planta. As análises fenotípicas das plantas transgênicas mostraram que plantas que superexpressam o gene que codifica o AtRALF33 apresentam fenótipo semi-anão, células foliares com área menor e com menor número de lóbulos. As plantas mutantes atralf33 e atralf23 apresentaram hastes e folhas maiores e células foliares com área maior. Plantas mutantes atralf34 não mostraram diferenças significativas quando comparadas com plantas selvagens e a análise do promotor do AtRALF34 mostrou uma expressão específica em estômatos, hipocótilo e ápice radicular. Com relação a purificação por afinidade, plantas mutantes mcca foram transformadas com a construção 35S:AtRALF1:HPB e usadas para obtenção dos extratos proteicos.
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