Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ana Raquel de Souza Monteiro
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: https://doi.org/10.11606/T.87.2018.tde-18092018-170642
Resumo: Neste trabalho, construiu-se linhagens recombinantes de Pichia pastoris e Saccharomyces cerevisiae que expressam hormônio de crescimento de carpa (GHc). Para expressão de GHc em P. pastoris, o cDNA de GH de H. molitrix foi inserido nos plasmídeos pHILD2 (expressão interna) e pPIC9K (expressão e secreção) dando origem aos plasmídeos pHILGH e pPICGH. A expressão em S. cerevisiae foi controlada pelo promotor e terminador PGK e o cassete de expressão ladeado por elementos δ, dirigindo a integração em múltiplas cópias no genoma. Ainda, construiu-se um plasmídeo onde a sequência de GHc foi fusionada a uma sequência sinal modificada (sequência sinal de proteína de K. lactis, fusionada a fragmento de interleucina humana), visando altos níveis de secreção. Os transformantes (expressão interna) expressaram proteína recombinante de 20 KDa. Um dos transformantes de S. cerevisiae secreta cerca de 1045,0 µg/ml de GHc. As proteínas recombinantes apresentaram hibridação específica contra anticorpo anti GHc comercial indicando que são biologicamente ativas.
id USP_6682dceea260f897f3f99dc58633ba3c
oai_identifier_str oai:teses.usp.br:tde-18092018-170642
network_acronym_str USP
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
repository_id_str 2721
spelling info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras. Expression in yeasts of the growth hormone of the carp Hypophthalmichthys molitrix. 2011-06-30Spartaco Astolfi FilhoElisabete Jose VicenteJoão Lucio de AzevedoJosé Augusto Ferraz de LimaClaudete Rodrigues PaulaMonica Bucciarelli RodriguezAna Raquel de Souza MonteiroUniversidade de São PauloBiotecnologiaUSPBR Pichia pastoris Pichia pastoris Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Feeding supplementation Fishering Heterologous protein Produção de alimento Proteína heteróloga Pscicultura Neste trabalho, construiu-se linhagens recombinantes de Pichia pastoris e Saccharomyces cerevisiae que expressam hormônio de crescimento de carpa (GHc). Para expressão de GHc em P. pastoris, o cDNA de GH de H. molitrix foi inserido nos plasmídeos pHILD2 (expressão interna) e pPIC9K (expressão e secreção) dando origem aos plasmídeos pHILGH e pPICGH. A expressão em S. cerevisiae foi controlada pelo promotor e terminador PGK e o cassete de expressão ladeado por elementos δ, dirigindo a integração em múltiplas cópias no genoma. Ainda, construiu-se um plasmídeo onde a sequência de GHc foi fusionada a uma sequência sinal modificada (sequência sinal de proteína de K. lactis, fusionada a fragmento de interleucina humana), visando altos níveis de secreção. Os transformantes (expressão interna) expressaram proteína recombinante de 20 KDa. Um dos transformantes de S. cerevisiae secreta cerca de 1045,0 µg/ml de GHc. As proteínas recombinantes apresentaram hibridação específica contra anticorpo anti GHc comercial indicando que são biologicamente ativas. In order to achieve the GHc expression in P. pastoris, the GH cDNA of the carp H. molitrix was introduced into the plasmids pHILD2 (intracellular expression) and pPIC9K (expression and secretion) originating the plasmids pHILGH and pPICGH. The expression of the GH cassette in S. cerevisiae was driven by the PGK promoter and terminator and the cassette was flanked by the δ elements, which provides multiple copies integration into the genome. We also constructed a plasmid in which the GHc cDNA sequence was fused to a modified signal sequence (K. lactis protein signal sequence fused to a human interleukin fragment), aiming to reach high levels of secretion. P. pastoris and S. cerevisiae recombinant clones (intracellular expression) were shown to express a recombinant protein of 20 KDa. One of the S. cerevisiae recombinant clones secreted around 1045.0 µg/ml of GHc. The recombinant proteins showed hybridization of the bands against antibody anti-commercial GHc. The results indicate that the recombinant proteins produced in this work are biologically active. https://doi.org/10.11606/T.87.2018.tde-18092018-170642info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USP2023-12-21T19:19:35Zoai:teses.usp.br:tde-18092018-170642Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212023-12-22T12:52:17.872712Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
dc.title.pt.fl_str_mv Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
dc.title.alternative.en.fl_str_mv Expression in yeasts of the growth hormone of the carp Hypophthalmichthys molitrix.
title Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
spellingShingle Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
Ana Raquel de Souza Monteiro
title_short Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
title_full Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
title_fullStr Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
title_full_unstemmed Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
title_sort Expressão de hormônio de crescimentro da carpa Hypophthalmichthys molitrix em leveduras.
author Ana Raquel de Souza Monteiro
author_facet Ana Raquel de Souza Monteiro
author_role author
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Spartaco Astolfi Filho
dc.contributor.advisor-co1.fl_str_mv Elisabete Jose Vicente
dc.contributor.referee1.fl_str_mv João Lucio de Azevedo
dc.contributor.referee2.fl_str_mv José Augusto Ferraz de Lima
dc.contributor.referee3.fl_str_mv Claudete Rodrigues Paula
dc.contributor.referee4.fl_str_mv Monica Bucciarelli Rodriguez
dc.contributor.author.fl_str_mv Ana Raquel de Souza Monteiro
contributor_str_mv Spartaco Astolfi Filho
Elisabete Jose Vicente
João Lucio de Azevedo
José Augusto Ferraz de Lima
Claudete Rodrigues Paula
Monica Bucciarelli Rodriguez
description Neste trabalho, construiu-se linhagens recombinantes de Pichia pastoris e Saccharomyces cerevisiae que expressam hormônio de crescimento de carpa (GHc). Para expressão de GHc em P. pastoris, o cDNA de GH de H. molitrix foi inserido nos plasmídeos pHILD2 (expressão interna) e pPIC9K (expressão e secreção) dando origem aos plasmídeos pHILGH e pPICGH. A expressão em S. cerevisiae foi controlada pelo promotor e terminador PGK e o cassete de expressão ladeado por elementos δ, dirigindo a integração em múltiplas cópias no genoma. Ainda, construiu-se um plasmídeo onde a sequência de GHc foi fusionada a uma sequência sinal modificada (sequência sinal de proteína de K. lactis, fusionada a fragmento de interleucina humana), visando altos níveis de secreção. Os transformantes (expressão interna) expressaram proteína recombinante de 20 KDa. Um dos transformantes de S. cerevisiae secreta cerca de 1045,0 µg/ml de GHc. As proteínas recombinantes apresentaram hibridação específica contra anticorpo anti GHc comercial indicando que são biologicamente ativas.
publishDate 2011
dc.date.issued.fl_str_mv 2011-06-30
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://doi.org/10.11606/T.87.2018.tde-18092018-170642
url https://doi.org/10.11606/T.87.2018.tde-18092018-170642
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade de São Paulo
dc.publisher.program.fl_str_mv Biotecnologia
dc.publisher.initials.fl_str_mv USP
dc.publisher.country.fl_str_mv BR
publisher.none.fl_str_mv Universidade de São Paulo
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
instname:Universidade de São Paulo (USP)
instacron:USP
instname_str Universidade de São Paulo (USP)
instacron_str USP
institution USP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)
repository.mail.fl_str_mv virginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.br
_version_ 1794502841227804672

Registros relacionados