Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131

• Autor(a) principal: Pomin, Stephanie Angelo
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28032024-141048/
• topic: corpos de inclusão; human prolactin; inclusion bodies; prolactina humana; radiolabeling; radiomarcação

A prolactina humana é uma proteína hormonal de 23 kDa produzida principalmente pela glândula pituitária, e desempenha várias funções biológicas, como por exemplo: regulação do sistema imunológico, hematopoiese e indução da lactação. No entanto, alterações em seu nível sérico estão diretamente associadas ao desenvolvimento de tumores de mama, próstata e ovário. O objetivo desse estudo foi a produção de hPRL recombinante, contendo 6 histidinas residuais e uma metionina na região N-terminal, que pudesse ser marcada com o radioisótopo I131 para uso como uma ferramenta diagnóstica de cânceres relacionados a prolactina. Neste estudo, a hPRLhis foi produzida no citoplasma de bactérias E. coli e os corpos de inclusão gerados foram solubilizados sob alta pressão hidrostática. Foi utilizado o plasmídeo pET28a(+) com o cDNA da prolactina humana na cepa BL21(DE3). Os corpos de inclusão foram isolados e lavados. Diversas condições de solubilização foram testadas, incluindo diferentes níveis de pH e agentes redutores. A proteína foi caracterizada e sua atividade biológica foi avaliada usando células BaF/3-LLP. A radiomarcação com 131I seguiu o método de marcação direta. A prolactina humana (hPRL) foi renaturada com sucesso em condições de alta pressão (2,4 kBar) e pH 10 com incubação por 16 horas em GSSH e GSH. Cerca de 3 mg de prolactina foram obtidos a partir deste processo em um volume total de 5 mL de meio dialisado. A radiomarcação da proteína atingiu um rendimento de até 75% com 100 μCi de Iodo e 10 μg de CLT. Este estudo estabeleceu as condições para produzir hPRLhis no citoplasma bacteriano usando renaturação de alta pressão. A hPRLhis demonstrou alto nível de expressão, pureza e atividade biológica, confirmada em ensaios com células. Além disso, foi radiomarcada para futuras pesquisas com receptores em células tumorais.