Estudo do efeito adjuvante do peptídeo derivado da proteína NS3 na resposta imunológica de camundongos vacinados com vírus Zika inativado

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Moraes, Jonathan Ballico de
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-30052019-154431/
Resumo: A febre Zika é uma enfermidade que afeta pessoas de países tropicais e subtropicais. O agente etiológico da doença é o vírus Zika (ZIKV), um flavivirus de genoma RNA de fita simples, transmitido principalmente por mosquitos do gênero Aedes. Devido a associação do ZIKV à microcefalia e síndrome de Guillain-Barré é necessário desenvolver estratégias para a prevenção da doença. Entre eles, a melhor medida profilática é a vacinação. A proteína NS3 tem sido relatada como um potencial ativador da imunidade celular contra o ZIKV e outros flavivírus, cuja atuação tem sido utilizada como um alvo contra infecções virais. Neste contexto, o objetivo deste projeto foi testar a eficiência da NS3 como ativadora da resposta imunológica e, em combinação com o vírus inativado, produzir uma vacina capaz de desenvolver proteção total contra a infecção viral. Uma sequência da NS3 foi clonada no vetor pET-26b, expresso em E. coli Rosetta e purificado por cromatografia de afinidade em coluna de níquel. A completa inativação do ZIKV foi realizada por meio de adição de formaldeído 0,05% e incubação por 3 dias. Combinações vacinais de NS3 e vírus inativado foram inoculados em vários grupos de camundongos 129 Sv/Ev e A129 nos dias 0 e 14. No dia 21, os camundongos A129 vacinados foram desafiados com o ZIKV selvagem e analisados segundo a perda de peso e sobrevivência por 21 dias. Os camundongos vacinados com NS3 e vírus inativado, na mesma formulação vacinal, tiveram 100% de proteção contra o ZIKV infeccioso. O sangue total e o baço foram coletados dos camundongos 129 Sv/Ev e A129 após 21 dias de uma nova imunização. Foi avaliado a produção de anticorpos específicos e neutralizantes contra ZIKV por ELISA e PRNT, mostrando que animais imunizados com a formulação vacinal \"vírus inativado com NS3\" produzem mais anticorpos contra o vírus, porém não foi detectado neutralização do vírus em nenhum grupo imunizado. O perfil de citocinas expressas por linfócitos do baço, analisado por FACS, sugere que a NS3 participa na modulação para uma resposta Th1. Esta abordagem possibilitou a avaliação de uma combinação vacinal que se mostrou capaz de prevenir a infecção com o ZIKV em camundongos susceptíveis
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Neste contexto, o objetivo deste projeto foi testar a eficiência da NS3 como ativadora da resposta imunológica e, em combinação com o vírus inativado, produzir uma vacina capaz de desenvolver proteção total contra a infecção viral. Uma sequência da NS3 foi clonada no vetor pET-26b, expresso em E. coli Rosetta e purificado por cromatografia de afinidade em coluna de níquel. A completa inativação do ZIKV foi realizada por meio de adição de formaldeído 0,05% e incubação por 3 dias. Combinações vacinais de NS3 e vírus inativado foram inoculados em vários grupos de camundongos 129 Sv/Ev e A129 nos dias 0 e 14. No dia 21, os camundongos A129 vacinados foram desafiados com o ZIKV selvagem e analisados segundo a perda de peso e sobrevivência por 21 dias. Os camundongos vacinados com NS3 e vírus inativado, na mesma formulação vacinal, tiveram 100% de proteção contra o ZIKV infeccioso. O sangue total e o baço foram coletados dos camundongos 129 Sv/Ev e A129 após 21 dias de uma nova imunização. Foi avaliado a produção de anticorpos específicos e neutralizantes contra ZIKV por ELISA e PRNT, mostrando que animais imunizados com a formulação vacinal \"vírus inativado com NS3\" produzem mais anticorpos contra o vírus, porém não foi detectado neutralização do vírus em nenhum grupo imunizado. O perfil de citocinas expressas por linfócitos do baço, analisado por FACS, sugere que a NS3 participa na modulação para uma resposta Th1. Esta abordagem possibilitou a avaliação de uma combinação vacinal que se mostrou capaz de prevenir a infecção com o ZIKV em camundongos susceptíveisZika Fever is a disease that affects many people in tropical and subtropical countries. The etiologic agent is Zika Virus (ZIKV), a single-stranded RNA flavivirus, transmitted mostly by Aedes mosquitoes, but sexual, congenital and blood transfusion transmission has also been reported. Due to the possible association of ZIKV to microcephaly and Guillain-Barré Syndrome, it is necessary to develop strategies for disease prevention. Among them, the best prophylactic measure is vaccination. The non-structural protein NS3 has been shown to stimulate cellular immunity response against others flaviviruses, and such activity has been used as a target against other flaviviruses infection. In this context, the aim of this project is to test the efficiency of NS3, in combination with the inactivated virus, to produce a vaccine capable of developing full protection against viral infection. The NS3 sequence was cloned into the pET-26b vector, expressed in E. coli Rosetta and purified by nickel column affinity chromatography. The complete inactivation of ZIKV was performed by addition of 0.05% formaldehyde and incubation for 3 days. Vaccine combinations of NS3 and inactivated virus were inoculated into 129 Sv/Ev and A129 mice on days 0 and 14. On day 21, vaccinated A129 mice were challenged with wild ZIKV and analyzed for weight loss and survival by 21 days. Mice vaccinated with NS3 and inactivated virus, in the same vaccine formulation, had 100% protection against infectious ZIKV. Whole blood and spleen cells were collected from 129 Sv/Ev and A129 mice after 21 days of new immunization. The production of specific and neutralizing antibodies against ZIKV was evaluated by Imunnofluorescence, ELISA and PRNT, showing that animals immunized with the vaccine formulation \"virus inactivated with NS3\" increased the antibodies\' level against the virus, but no virus neutralization was detected in any immunized group. The cytokine profile expressed by spleen lymphocytes, analyzed by FACS, suggests that NS3 participates in modulation for a Th1 response. This approach gave us the opportunity to evaluate this vaccinal combination that was shown to be able to prevent infection with ZIKV in susceptible miceBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPFonseca, Benedito Antonio Lopes daMoraes, Jonathan Ballico de2018-12-12info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-30052019-154431/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2019-07-04T17:57:47Zoai:teses.usp.br:tde-30052019-154431Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212019-07-04T17:57:47Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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