Efeitos dos microRNAs 100 e 145 sobre seus genes alvo no câncer de próstata metastático - Estudo in vivo

• Autor(a) principal: Schreiter, Vanessa Ribeiro Guimarães
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-31102020-125503/
• topic: Biologia molecular; Ensaios antitumorais modelo de xenoenxerto; Expressão gênica; Gene expression; Metástase neoplásica; MicroRNAs; Micrornas; Molecular biology; Neoplasias da próstata; Neoplasm metastasis; Prostatic neoplasms; Xenograft model antitumor assays

Introdução: O Câncer de Próstata (CaP) metastático é uma doença incurável cujo tratamento tradicional e mais eficiente é o bloqueio androgênico. Essa modalidade, entretanto, tem papel limitado e após período médio de cinco anos os tumores adquirem o status resistente à castração, sendo nessa fase as opções terapêuticas muito limitadas. O conhecimento de vias moleculares vem propiciando o desenvolvimento de moléculas ou anticorpos para serem utilizados como terapia alvo em diversos tipos de câncer. Os microRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas, fundamentais para o controle da expressão de genes e a alteração de sua expressão tem sido descrita no processo de carcinogênese do CaP. Neste estudo avaliamos um possível papel dos miRNAs 100 e 145 em modelo in vivo de CaP metastático, no controle de seus genes alvo, KRAS, cMYC e SMARCA5. Objetivo: Analisar a atividade dos miRNAs 100 e 145 no tratamento do CaP metastático em camundongos atímicos e estudar os efeitos desse tratamento nos níveis de expressão de seus genes alvo cMYC, KRAS, mTOR e SMARCA5 no tecido tumoral. Métodos: Para a indução do CaP metastático, os camundongos machos Balb/c nude foram inoculados com células PC-3M-luc-C6 (linhagem bioluminescente) intra venticular esquerdo. Após a o estabelecimento da doença metastática, no dia 21, os animais foram separados em grupos de tratamentos com o miR-100, anti-miR-100 e miR-145 e seus respectivos controles negativos, associados ao atelocolágeno através de três injeções por via sistêmica com intervalos de 3 dias. As imagens do crescimento tumoral foram obtidas no equipamento IVIS (Spectrum). Três dias pós a última dose de tratamento (dia 30), os animais foram eutanasiados e o tecido tumoral foi avaliado por PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) para determinação do nível de expressão dos miRNAs 100 e 145 e de seus genes alvo cMYC, KRAS, mTOR e SMARCA5. Resultados: O grupo de animais tratado com miR-145 apresentou a menor velocidade de crescimento tumoral. O grupo tratado com miR-100 mostrou maior expressão intratumoral de miR-100 e subexpressão de mTOR. SMARCA5 esteve superexpresso neste grupo. Os animais tratados com anti-miR-100 mostraram redução na expressão de miR-100 intratumoral, subexpressão de mTOR e ausência de alterações em SMARCA5. No grupo tratado com miR-145 houve aumento dos níveis de expressão de miR-145 e redução dos níveis de KRAS e cMYC. Conclusão: Demonstramos em modelo in vivo o efeito dos miRNAs 100 e 145 sobre o crescimento tumoral e no controle de expressão de seus genes alvo mTOR, cMYC e KRAS