Síntese de modelos esferoidais de células melanômicas em diferentes graus de progressão associados a sistemas dermo-equivalentes para tratamento via terapia fotodinâmica

• Autor(a) principal: Mônico, Danielli Azevedo
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-05042022-152335/
• topic: Chloroaluminum phthalocyanine; Dermal equivalent; Engenharia de tecidos; Equivalente dérmico; Esferoide multicelular; Ftalocianina de alumínio-cloro; Melanoma; Melanoma; Multicellular spheroid; Photodynamic therapy; Terapia fotodinâmica; Tissue engineering

Os Equivalentes de Pele Reconstituídas têm sido amplamente estudados para obtenção e padronização das técnicas, assim como a utilização em testes de corrosividade e irritação de reagentes e cosméticos, por exemplo, como forma de substituir o uso de animais para esses testes. Também estão sendo desenvolvidos os Modelos de Pele Melanoma, uma vez que a compreensão das células tumorais é mais bem estudada em um sistema que mimetiza a integração das células do melanoma com os demais componentes da pele humana. Esses modelos têm sido utilizados para estudos de progressão tumoral e de desenvolvimento de novas estratégias e tratamentos do tumor. O presente trabalho foi baseado no acoplamento de cultura celular tridimensional de células de melanoma (WM 1617) na forma de esferoides multicelulares e da estrutura tridimensional equivalente dérmico que foi constituído de matriz de colágeno Tipo I e fibroblastos saudáveis. Primeiramente, foi realizado o preparo e caracterização dos esferoides multicelulares utilizando as células WM 35, WM 1552, WM 278 e WM 1617 que representam os estágios de crescimento radial, vertical e metastático do melanoma. Foi observado o preparo com alta reprodutibilidade dos esferoides multicelulares utilizando as células WM 35, WM 278 e WM 1617, enquanto as células WM 1552 não foram possíveis de formar os agregados celulares utilizando o método da gota suspensa. As células WM 1617 foram escolhidas por representar o estágio de crescimento metastático do melanoma. Essas células foram caracterizadas quanto à internalização de NE-AlClPc, assim como a concentração ideal e dose de energia necessária tanto para crescimento em monocamada (2D), quanto para esferoide multicelular (3D). Os esferoides formados foram incluídos em equivalentes dérmicos e foi verificado o comportamento de invasão celular do esferoide dentro da matriz de colágeno. O esferoide multicelular foi tratado com 1,0 µmol L-1 de NE-AlClPc antes de ser incluído ao equivalente dérmico. Após o acoplamento entre os sistemas, o acoplado foi irradiado com luz vermelha na dose de energia de 25 J cm-2 (660 nm) o que ocasionou em morte celular do agregado tumoral e preservação do tecido saudável.