O estudo ontogenético da composição de inibidores de veneno de serpentes e a avaliação da atividade neutralizante do -PLI presente no plasma de Bothrops jararaca

• Autor(a) principal: Silva, Caroline Serino
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-18052022-143245/
• topic: Envenenamento; Envenomation; Fosfolipase A2; Inibidor de PLA2; Phospholipases A2; PLA2 inhibitor; Serpente peçonhenta; Venomous snakes

Os inibidores naturais de venenos de serpentes têm sido estudados há mais de um século. Entre eles, estão as proteínas de plasma de alguns mamíferos e de serpentes não peçonhentas e peçonhentas, que possuem a capacidade de promover uma resistência ao veneno. Estas proteínas têm despertado o interesse biotecnológico, já que são uma ótima alternativa para o desenvolvimento de novos fármacos. As principais proteínas encontradas no plasma desses animais, com capacidade de neutralização do veneno, são os inibidores de metaloproteinases e os inibidores de PLA2 (PLIs). A PLA2 atua no efeito local do envenenamento, causando inflamação do tecido na área afetada. Nesse contexto, recentemente foi isolado o γBjPLI, que é um PLI presente no sangue da serpente peçonhenta <i>Bothrops jararaca</i>. Esta proteína pertence à classe gama (γ), com base em domínios estruturais característicos. O γBjPLI possui aproximadamente 22 kDa e inibe as atividades enzimáticas, edematogênicas e mionecróticas das PLA2, sugerindo um papel desse inibidor na proteção dessas serpentes contra o autoenvenenamento. Baseado nessas informações, neste trabalho, foi estudado de forma comparativa a composição proteica do plasma de neonatos, jovens e adultos, fêmeas e machos de <i>B jararaca</i>, por análises de SDS-PAGE, <i>Western blotting</i>, cromatografia de afinidade, ELISA e espectrometria de massa. Tais análises permitiram identificar proteínas do tipo PLI (αPLI, βPLI e γPLI) em todas as fases da vida, sendo que αPLI e βPLI foram identificados pela primeira vez no plasma da serpente <i>B. jararaca</i>. Também foi realizada a avaliação da interação e neutralização da atividade anticoagulante da crotoxina por tromboelastometria, em que o γBjPLI foi capaz de inibir até 43% da atividade dessa toxina. Ademais, mostrou uma maior afinidade pela PLA2 Asp-49 em comparação à PLA2 Lys-49, tanto por apresentar uma alteração em espectros obtidos por dicroísmo circular, quanto pela inibição das atividades miotóxicas e edematogênicas, com valores de 19,6% e 38,5% para a PLA2 Asp-49, superiores aos 16% e 19,6% para a PLA2 Lys-49, respectivamente. Além disso, para estabelecer novos métodos de obtenção destes inibidores com maiores rendimentos mantendo a estabilidade e atividade, o γBjPLI foi clonado e expresso utilizando o vetor pET28a e a cepa de expressão <i>SHuffle</i> da espécie de bactéria <i>Escherichia coli.</i>.