Efeitos antineoplásicos do dicloroacetato de sódio (DCA) e omeprazol em linhagens de melanoma oral canino: estudo dos mecanismos de ação
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2023 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
Texto Completo: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-16062023-121433/ |
Resumo: | O dicloroacetato de sódio (DCA) é um inibidor da piruvato desidrogenase quinase (PDK), e o omeprazol (OMP) é um inibidor da bomba de prótons. Neste trabalho, investigamos a hipótese de que DCA e OMP possuam efeitos antineoplásicos sinérgicos desencadeados a partir da modulação metabólica da via glicolítica, e seus mecanismos de ação em células de melanoma oral canino (MOC) e melanoma cutâneo humano. Para tanto, as linhagens celulares CMGD5 (melanoma oral canino) e SK-MEL-28 (melanoma humano) foram cultivadas e tratadas com diferentes concentrações de DCA e OMP individualmente ou em associação. Uma triagem inicial para determinação da viabilidade celular após o uso das duas drogas individualmente ou em associação foi realizada por meio do ensaio de cristal violeta. A morte celular por apoptose ou necrose foi estudada por citometria de fluxo, utilizando os marcadores fluorescentes anexina V e iodeto de propídeo. A análise bioenergética das células tratadas ou não com DCA e/ou OMP foi realizada por meio do ensaio de SeaHorseXF, avaliando os níveis de consumo de oxigênio (OCR) de ambas as linhagens após o tratamento com DCA e/ou OMP. O uso da combinação dos dois fármacos produziu redução significante na viabilidade das linhagens de melanoma oral canino e melanoma humano. A combinação entre DCA e OMP na linhagem CMGD5 acarretou maiores índices de morte por apoptose precoce, enquanto na linhagem SK-MEL-28 os dois tipos de morte predominantes foram apoptose precoce e necrose. Na avaliação de OCR, DCA ou OMP não produziram efeitos bioenergéticos significativos nas células CMGD5 e SK-MEL-28; seus efeitos foram similares aos das células não tratadas. Em conclusão, por apresentarem redução de viabilidade celular e morte por apoptose, DCA e OMP podem ser considerados drogas de reaproveitamento para o tratamento de melanoma. Quanto aos mecanismos de ação, DCA e OMP parecem não interferir em uma perspectiva metabólica glicolítica nas concentrações testadas nas células CMGD5 e SK-MEL-28. Mais estudos são necessários para determinar os mecanismos metabólicos que levam aos efeitos antineoplásicos de DCA e OMP em melanoma oral canino e melanoma humano para considerar as drogas no uso da rotina de pacientes com melanoma |
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Efeitos antineoplásicos do dicloroacetato de sódio (DCA) e omeprazol em linhagens de melanoma oral canino: estudo dos mecanismos de açãoAntineoplastic effects of dichloroacetate sodium and omeprazole in canine oral melanoma cell lines: a study of the mechanisms of actionÁcido dicloroacéticoCanineCaninoDichloroacetic acidEnzime inhibitorsMelanomaMelanomaMetabolic modulatorsModuladores metabólicosNeoplasiasNeoplasmsOmeprazolOmeprazoleO dicloroacetato de sódio (DCA) é um inibidor da piruvato desidrogenase quinase (PDK), e o omeprazol (OMP) é um inibidor da bomba de prótons. Neste trabalho, investigamos a hipótese de que DCA e OMP possuam efeitos antineoplásicos sinérgicos desencadeados a partir da modulação metabólica da via glicolítica, e seus mecanismos de ação em células de melanoma oral canino (MOC) e melanoma cutâneo humano. Para tanto, as linhagens celulares CMGD5 (melanoma oral canino) e SK-MEL-28 (melanoma humano) foram cultivadas e tratadas com diferentes concentrações de DCA e OMP individualmente ou em associação. Uma triagem inicial para determinação da viabilidade celular após o uso das duas drogas individualmente ou em associação foi realizada por meio do ensaio de cristal violeta. A morte celular por apoptose ou necrose foi estudada por citometria de fluxo, utilizando os marcadores fluorescentes anexina V e iodeto de propídeo. A análise bioenergética das células tratadas ou não com DCA e/ou OMP foi realizada por meio do ensaio de SeaHorseXF, avaliando os níveis de consumo de oxigênio (OCR) de ambas as linhagens após o tratamento com DCA e/ou OMP. O uso da combinação dos dois fármacos produziu redução significante na viabilidade das linhagens de melanoma oral canino e melanoma humano. A combinação entre DCA e OMP na linhagem CMGD5 acarretou maiores índices de morte por apoptose precoce, enquanto na linhagem SK-MEL-28 os dois tipos de morte predominantes foram apoptose precoce e necrose. Na avaliação de OCR, DCA ou OMP não produziram efeitos bioenergéticos significativos nas células CMGD5 e SK-MEL-28; seus efeitos foram similares aos das células não tratadas. Em conclusão, por apresentarem redução de viabilidade celular e morte por apoptose, DCA e OMP podem ser considerados drogas de reaproveitamento para o tratamento de melanoma. Quanto aos mecanismos de ação, DCA e OMP parecem não interferir em uma perspectiva metabólica glicolítica nas concentrações testadas nas células CMGD5 e SK-MEL-28. Mais estudos são necessários para determinar os mecanismos metabólicos que levam aos efeitos antineoplásicos de DCA e OMP em melanoma oral canino e melanoma humano para considerar as drogas no uso da rotina de pacientes com melanomaSodium dichloroacetate (DCA) is a pyruvate dehydrogenase kinase (PDK) inhibitor, and omeprazole (OMP) is a proton pump inhibitor. In this work, we investigated the hypothesis that DCA and OMP have synergistic antineoplastic effects triggered by the metabolic modulation of the glycolytic pathway, and their mechanisms of action in canine oral melanoma (MOC) and human cutaneous melanoma cells. Therefore, the cell lines CMGD5 (canine oral melanoma) and SK-MEL-28 (human melanoma) were cultivated and treated with different concentrations of DCA and OMP individually or in association. An initial screening to determine cell viability after the use of the two drugs individually or in combination was performed using the crystal violet assay. Cell death by apoptosis or necrosis was studied by flow cytometry, using the fluorescent markers annexin V and propidium iodide. Bioenergetic analysis of cells treated or not with DCA and/or OMP was performed using the SeaHorseXF assay, evaluating the levels of oxygen consumption (OCR) of both strains after treatment with DCA and/or OMP. The use of the combination of the two drugs produced a significant reduction in the viability of the canine oral melanoma and human melanoma strains. The combination of DCA and OMP in the CMGD5 strain resulted in higher death rates by early apoptosis, while in the SK-MEL-28 strain the two predominant types of death were early apoptosis and necrosis. In the evaluation of OCR, DCA or OMP did not produce significant bioenergetic effects on CMGD5 and SK-MEL-28 cells; its effects were similar to those of untreated cells. In conclusion, as they present reduced cell viability and death by apoptosis, DCA and OMP can be considered reusage drugs for the treatment of melanoma. As for the mechanisms of action, DCA and OMP do not seem to interfere in a glycolytic metabolic perspective at the concentrations tested in CMGD5 and SK-MEL-28 cells. More studies are needed to determine the metabolic mechanisms leading to the antineoplastic effects of DCA and OMP in canine oral melanoma and human melanoma, and if they are eligible drugs to treat canines with oral melanomaBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPDagli, Maria Lucia ZaidanToledo, Gabriela Fernandes de2023-03-14info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-16062023-121433/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2023-07-03T17:55:23Zoai:teses.usp.br:tde-16062023-121433Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212023-07-03T17:55:23Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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