Expressão do fator estimulador de colônia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em Escherichia coli.

• Autor(a) principal: Gomes, Fernanda Resende
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13082010-163827/
• topic: Escherichia coli; Escherichia coli; Bacterial genetics; Biological factors; Corpos de Inclusão; Expressão heteróloga; Fatores biológicos; Genética bacteriana; Granulócitos (Humano); Granulócitos citoplasmáticos; Granulocytes (Human); Granulocytes cytoplasmic; Heterolog expression; Inclusion body; rhG-CSF; rhG-CSF

O Fator estimulador de colônias de granulócitos humano recombinante (rhG-CSF) produzido em Escherichia coli é uma proteína não glicosilada com 175 aminoácidos, de grande importância clínica para o tratamento de neutropenias. O presente trabalho propõe a construção de dois sistemas de expressão em E. coli, um sistema para obtenção do rhG-CSF no citoplasma e outro para secreção da proteína recombinante no meio de cultura utilizando a sequência sinal da L-asparaginase II. Os dois sistemas de expressão foram testados e comparados. A partir desses dados, passou-se para as etapas de obtenção do rhG-CSF com o sistema de expressão sem a sequência sinal. As etapas de renaturação e purificação foram eficientes obtendo-se uma proteína com adequado grau de pureza, integridade estrutural e atividade biológica. Essa proteína também foi utilizada com sucesso para a produção de anticorpos policlonais em camundongos. Com os resultados obtidos, a proteína rhG-CSF mostrou-se viável para estudos posteriores em bioreatores e produção em escala-piloto.