Sensoriamento óptico do anticorpo AQP4-IgG utilizando nanobiossensores de nanopartículas de prata associados com epítopos da proteína AQP4

• Autor(a) principal: Higa, Akemi Martins
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5179/tde-13122022-124113/
• topic: Immunoglobulins; Imunoglobulinas; Nanoparticles; Nanopartículas; Nanotechnology; Nanotecnologia; Neuromielite óptica; Neuromyelitis optica; Optical sensors; Peptídeos; Peptides; Sensores ópticos

As doenças do espectro da neuromielite óptica (ENMO) são classificadas como crônicas inflamatórias e autoimunes, e afetam o sistema nervoso central. Estas se caracterizam pela existência de um biomarcador, o autoanticorpo AQP4-IgG, que reconhece seletivamente a proteína Aquaporina-4 presente nos astrócitos. O biomarcador não é detectado em torno de 10- 27% dos pacientes diagnosticados, que são classificados como ENMO soronegativos. A ausência do biomarcador dificulta o processo diagnóstico e a definição terapêutica desses pacientes. Sobre este grupo, discute-se a possibilidade de alguns representarem casos falsonegativos decorrentes da sensibilidade insuficiente dos testes aplicados ou da existência de outros alvos antigênicos nesses pacientes. O primeiro objetivo deste trabalho foi desenvolver um nanobiossensor de nanopartículas de prata (AgNPs) funcionalizadas com epítopos da AQP4, para separar os grupos clínicos ENMO, EM e saudáveis. A partir disso, investigar as hipóteses que permeiam esse grupo, quanto à detecção dependente da concentração dos anticorpos e do epítopo utilizado. Os nanobiossensores que melhor separaram os grupos clínicos foram os AgNPs-AQP461-70 e AgNPs-AQP4201-210. Com o nanobiossensor AgNPsAQP461-70 identificamos que a detecção do biomarcador é dependente da concentração e do epítopo conjugado à superfície do nanobiossensor. Visando aumentar a sensibilidade do método para detectar o biomarcador no grupo ENMO soronegativo, foi feita uma triagem dos peptídeos compreendendo toda a extensão da proteína, que contém 323 aminoácidos. A triagem foi feita com epítopos separados a cada 10 aminoácidos. Essa triagem mostrou que os seguintes epítopos: AgNPs-AQP41-10, AgNPs-AQP411-20, AgNPs-AQP471-80, AgNPs-AQP481-90, AgNPsAQP491-100 e AgNPs-AQP4261-270 são fortes candidatos para comporem sistemas de detecção para reteste de pacientes ENMO soronegativos. A sensibilidade do nanobiossensor melhor estudado neste projeto (AgNPs-AQP461-70) foi de 84,62%, superior aos métodos convencionais já registrados para a detecção do biomarcador, mas a especificidade foi inferior à deles (66,67%). Os dados obtidos da triagem dos peptídeos, somados ao aumento do número de amostras, pode aumentar a acurácia dos nanobiossensores desenvolvidos para testar aqueles pacientes com diagnóstico clínico de ENMO, mas sem confirmação laboratorial