Uso tópico de bactérias predadoras reduz a destruição tecidual periodontal em ratos com periodontite experimental: estudo histológico, microtomográfico, imunológico e microbiológico

• Autor(a) principal: Silva, Pedro Henrique Felix
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/58/58132/tde-29082018-132351/
• topic: Bdellovibrio; Bdellovibrio; Biologic predator; Doença periodontal; Periodontal diseases; Predadores biológicos; Ratos; Rats

Este estudo avaliou os efeitos da administração tópica de Bdellovibrio bacteriovorus HD100 na periodontite experimental em ratos. 32 ratos foram alocados nos grupos CT, DPT, CT-HD100 e DPT-HD100. No dia 0 do experimento, os animais dos grupos DPT e DPT-HD100 receberam ligaduras de seda ao redor dos primeiros molares inferiores (PMIs). Nos grupos CT-HD100 e DPT-HD100, suspensões de 1 mL contendo B. bacteriovorus HD100 foram administradas topicamente na região subgengival de PMIs nos dias 0, 3 e 7. Nos grupos CT e DPT, administrações tópicas foram realizadas com uma suspensão não contendo B. bacteriovorus HD100. Todos os animais foram submetidos à eutanásia no dia 14 do experimento. O tecido gengival, hemi-mandíbulas e biofilme bucal foram coletados para avaliação dos seguintes parâmetros: i) microarquitetura óssea, volume ósseo e nível ósseo alveolar (microtomografia computadorizada por transmissão de raios X micro-CT); ii) níveis de inserção conjuntiva (análise histomorfométrica); iii) microbiota bacteriana (checkerboard DNA-DNA hybridization); iv) expressão de citocinas inflamatórias e fatores de transcrição (análise imunoenzimática - Multiplex e reação em cadeia da polimerase por transcriptase reversa em tempo real); iii) padrão de imunomarcação para beta defensinas (BD), receptores do tipo Toll (TLR) e grupamentos de diferenciação (CD) (reações imunohistoquímicas). Testes in vitro foram também realizados para avaliar o potencial antimicrobiano de B. bacteriovorus HD100 contra periodontopatógenos. Os dados foram analisados estatisticamente (p < 0,05). O grupo DPT-HD100 apresentou menores porosidade óssea, separação trabecular, nível ósseo alveolar e nível de inserção conjuntiva, bem como maiores volume ósseo e número de trabéculas ósseas quando comparado ao Grupo DPT (p < 0,05). O grupo DPT-HD100 apresentou maiores proporções de espécies semelhantes à Actinomyces e Streptococcus e menores proporções de espécies semelhantes à Prevotella intermedia, Peptostreptococcus micros, Fusobacterium nucleatum, Fusobacterium polymorphum, Eikenella corrodens, Eubacterium nodatum, Campylobacter gracilis, Capnocytophaga sputigena e Veillonella parvula quando comparado ao Grupo DPT. Nas análises de parâmetros imunoinflamatórios, o Grupo DPT-HD100 apresentou maiores níveis de Proteina quimioatrativa de monócito1 (MCP-1), Células T normais expressas e secretadas, reguladas por ativação (RANTES), Osteoprotegerina (OPG), Fator de Crescimento Transformador (TGF)-&alpha; e Interleucina (IL)-10 e menores níveis de Fator de Necrose Tumoral (TNF)-&beta;, bem como maior padrão de imunomarcação para BD-1, BD-2 e BD-3 quando comparado ao Grupo DPT (p < 0,05). Para os níveis de IL-1, IL-6, Fator Estimulador de Colônias de Macrófagos (M-CSF), Ligante do Receptor Ativador de Fator Nuclear kappa-B (RANK-L) e padrões de imunomarcação para TLR-2, TLR-4, CD-4, CD-8 e CD-57, não foram observadas diferenças entre os grupos DPT e DPT-HD100. Na análise de expressão gênica, o Grupo DPT-HD100 apresentou maior expressão de IL-17, IL-10 e Forkhead box P3 (FOXP3) quando comparado ao Grupo DPT (p < 0,05). Nos testes in vitro, as co-culturas de periodontopatógenos (F. nucleatum, P. intermedia e A. ctinomycetemcomitans) e B. bacteriovorus HD100 apresentaram menor densidade óptica do que as culturas isoladas de periodontopatógenos em 48 horas. O uso tópico de B. bacteriovorus HD100 modifica os parâmetros imunoinflamatórios e microbiológicos, promovendo um efeito protetor contra a perda óssea alveolar e perda de inserção do tecido conjuntivo em ratos com periodontite experimental