Efeito de quimioterápicos inibidores de histonas deacetilases sobre células-tronco tumorais derivadas de linhagens de carcinoma mucoepidermoide de glândula salivar

• Autor(a) principal: Aguiar, Emília Maria Gomes
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23154/tde-26062023-112225/
• topic: Cancer stem cells; Carcinoma mucoepidermoide de glândula salivar; Células-tronco tumorais; Chemotherapy; Histone deacetylase inhibitors; Inibidores de histonas deacetilases; Mucoepidermoid carcinoma of salivary gland; Quimioterapia

O tratamento quimioterápico para o carcinoma mucoepidermoide de glândula salivar (CME) é, usualmente, reservado para casos agressivos e metastáticos, devido a sua baixa resposta à radio e quimioterapia, a qual é associada à presença de célulastronco de câncer na população intratumoral. Nesse contexto, os fármacos inibidores de histonas deacetilases (iHDACs) surgiram como uma estratégia, em potencial, para o tratamento do câncer, já que a hipoacetilação das histonas tem sido identificada em vários tipos de câncer. Os iHDACs induzem a rápida hiperacetilação das histonas e possuem importantes efeitos antitumorais, incluindo a ação sobre Células-tronco tumorais (CTTs). Desse modo, este estudo se propôs a avaliar os efeitos antitumorais de dois fármacos iHDACs (Panobinostat - PAN e Romidepsin - ROM), isoladamente e em associação com a Cisplatina (CIS), sobre duas linhagens celulares derivadas de CME (UM-HMC1 e UM-HMC3A), com foco na população de CTTs. A ação dos iHDACs foi investigada quanto a capacidade de inibir: (i) viabilidade celular (MTS e sulforodamina B); (ii) migração coletiva (ferida) e individual (transwell); (iii) invasão (transwell com matrigel); (iv) clonogenicidade e autorrenovação (formação de colônias e esferas); (v) expressão de marcadores relacionados ao fenótipo tronco-tumoral (citometria de fluxo, RT-qPCR e qPCR array), após 48h de tratamento prévio com as doses de IC50 dos fármacos. As propriedades de autorrenovação e clonogenicidade, também foram analisadas em condições de desacetilação, obtidas pela manutenção dos fármacos no meio de cultivo por um período prolongado (tratamento concomitante). Os resultados mostraram que o tratamento prévio com os iHDACs induziram efeitos antitumorais, reduzindo a capacidade de migração, invasão e de formação de esferas, em ambas as linhagens celulares; apesar de não terem atuado eficientemente sobre as colônias tumorais, e nem na redução da população com fenótipo tronco-tumoral (ALDH+/CD44+) na linhagem UM-HMC3A, derivada de tumor recidivante. Já os tratamentos em associação com a Cisplatina (PAN+CIS e ROM+CIS), reduziram eficientemente o número de esferas e, ainda, potencializaram o efeito inibitório dos iHDACs sobre a capacidade de migração e invasão celular. Contudo, a redução da resistência a CIS só foi constatada quando os fármacos em associação, permaneceram em contato com as células por um período mais prolongado. Apesar de não ter havido alterações relevantes na expressão de genes relacionados à autorrenovação e pluripotência celular, após 48h de tratamento, os resultados obtidos em um screening com 84 genes, realizado com placas de qPCR array, revelaram a expressão diferencial de diversos genes relacionados à CTTs humanas. Coletivamente, os resultados obtidos nesse estudo, evidenciaram os efeitos antitumorais da monoterapia dos iHDACs (PAN e ROM) sobre linhagens de CME, apesar dos tratamentos em associação com a CIS, não terem reduzido efetivamente a resistência das células à ação da Cisplatina. Portanto, os dados aqui apresentados, ao mesmo tempo que comprovam os efeitos in vitro dos dois iHDACs em linhagens de CME, ressaltam a necessidade de outros estudos, visando identificar combinações terapêuticas mais efetivas na erradicação das CTTs e, consequentemente, no tratamento dos pacientes acometidos pelo CME de glândula salivar. Therefore, the data presented here, while confirming in vitro effects of the two iHDACs in CME cell lines, highlight the need for further studies to identify more effective therapeutic combinations in the eradication of CTT and, consequently, in the treatment of affected patients by MEC.