Efeito da insulina na criopreservação do sêmen bovino sobre a produção in vitro de embriões

• Autor(a) principal: Almeida, Flavia dos Santos
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-15052020-123158/
• topic: Bulls; Criopreservação; Cryopreservation; Espermatozoide; FIV; IVF; Sperm; Touros

A insulina é um hormônio anabólico capaz de atuar na proteção das células espermáticas para minimizar os insultos da criopreservação, também atua na produção de embriões in vitro (PIVE) trazendo benefícios no desenvolvimento embrionário devido ao seu efeito antiapoptótico e mitogênico. Desta forma, o presente trabalho visa avaliar os efeitos da adição de insulina ao meio de criopreservação de sêmen sobre o potencial da PIVE de embriões. Para isso, foram utilizados dois ejaculados de seis touros (n=12), sendo que cada ejaculado foi distribuído em dois tratamentos para a criopreservação: Grupo controle (CO): sêmen diluído em meio Triladyl® (n=12) e Grupo Insulina (IN): sêmen diluído em meio Triladyl suplementado com insulina (150 &micro;UI/mL, n=12). Duas palhetas de sêmen de cada partida de cada tratamento foram descongeladas, homogeneizadas e submetidas à seleção em gradiente de Percoll®. Os espermatozoides obtidos após Percoll® foram avaliados quanto à motilidade, vigor, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial mitocondrial e fragmentação de DNA e, após foram utilizados para a fecundação in vitro (FIV) dos ovócitos. Para a PIV foram feitas quatro repetições, sendo aspirados folículos de ovários provenientes de abatedouro comercial e selecionados os complexos cumulus-oócito que apresentavam camadas de células do cumullus compactas e oócito com citoplasma homogêneo. Os oócitos foram submetidos ao processo de maturação in vitro (MIV) (24h/38,5&deg;C/5%CO2).Para a FIV, os oócitos maturados foram distribuídos em dois grupos, sendo que um grupo recebeu o sêmen CO (n=1587)oócitos e o outro o sêmen IN (n= 1580).oócitos e incubados (18h/38,5&deg;C/5%CO2). Após a FIV os presumíveis zigotos foram transferidos para o cultivo in vitro seguindo a ordem dos tratamentos e incubados por 8 dias (38,5&deg;C/5%CO2/5%O2/90%N2). A resposta da FIV foi determinada pela taxa de clivagem no terceiro dia do cultivo. No dia 8, avaliou-se o número de blastocisto e a taxa de desenvolvimento em relação aos clivados. Os dados foram submetidos à análise de variância pelo procedimento misto (PROC MIXED) do programa SAS versão 9.3. Em todas as análises estatísticas, o nível de significância considerado foi de P&ge;0,05. A taxa de clivagem (D3) não foi afetada pela adição de insulina ao diluidor de criopreservação do sêmen (64,21&#177;2,04 x 63,62&#177;1,69%), mas foi notada que a insulina causou redução nas taxas de blastocisto (CO: 24,06&#177;2,69% x IN: 20,04&#177;2,54%) e de desenvolvimento embrionário (CO: 35,81&#177;3,23% x IN: 30,21&#177;3,37%). Por outro lado, foram encontrados efeitos de touro para as taxas de clivagem (variando de 54,19&#177;2,34 a 71,91&#177;2,39%), de blastocisto (variando de 6,76&#177;0,97 a 36,18&#177;2,22%) e de desenvolvimento embrionário (variando de 12,32&#177;1,53 a 50,12&#177;2,04%), mas estas alterações não foram relacionadas com variações na qualidade espermática. Em conclusão, a insulina adicionada ao meio de criopreservação dos espermatozoides não apresentou efeito benéfico nas condições experimentais sobre as taxas de produção de embriões in vitro<i/>.