Análise enantiosseletiva do carvedilol em plasma humano por SALLE/LC-MS/MS

• Autor(a) principal: Pavan, Marcella Galatti
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-28102021-155706/
• topic: Carvedilol; Carvedilol; LC-MS/MS; LC-MS/MS; Metabolites; Metabólitos; Plasma; Plasma; SALLE; SALLE

O carvedilol é um betabloqueador não seletivo de terceira geração utilizado no tratamento de doenças como hipertensão, angina pectoris, arritmia cardíaca e insuficiência cardíaca congestiva. É comercializado como uma mistura racêmica dos enantiômeros (S)-(-) e (R)-(+). O carvedilol é amplamente utilizado em pacientes submetidos à cirurgia bariátrica, no período anterior e posterior a cirurgia. Entretanto, uma das consequências dessa cirurgia é o comprometimento da absorção de nutrientes e fármacos. Sendo assim a determinação da concentração plasmática do carvedilol nestes pacientes é de grande importância para realizar o ajuste de dose. A maioria dos métodos descritos na literatura para a quantificação do carvedilol em amostras de plasma utiliza técnicas de preparo de amostras como a precipitação de proteínas, a extração líquido-líquido, a extração em suporte sólido, a microextração líquido-líquido dispersiva e a extração em fase sólida. Até o momento não foi relatado nenhum método usando a extração líquido-líquido assistida por salting out (SALLE). Assim, o objetivo desse trabalho foi desenvolver e validar um método para análise dos enantiômeros do carvedilol em plasma humano usando a SALLE e análise por LC-MS/MS e aplicar esse método em amostras de plasma de pacientes do HCFMRP/USP submetidos à cirurgia bariátrica. A seleção do solvente orgânico e solução salina, a serem utilizadas na extração, foi feita baseada em testes qualitativos. A identificação dos parâmetros que influenciam na eficiência da SALLE foi feita empregando um planejamento fatorial fracionário 24-1 com 4 fatores. Posteriormente foi empregado um delineamento composto central (CCD) para otimizar a condição ótima de extração. A separação cromatográfica dos enantiômeros do carvedilol e metabólitos foi realizada em uma coluna Chirobiotic V/Astec (0,46x25cmx 5 μm) acoplada a uma coluna de guarda Lichrospher 100 RP-18 (5uM, 4x4 mm). A fase móvel foi composta por uma mistura de metanol:etanol (90:10 , v/v) e 0,02% de dietilamina e 0,18% ácido acético , em uma temperatura de 21oC e vazão 0,6 mL/min. Foi utilizado o modo positivo de ionização por eletrospray (ESI+) e as transições avaliadas foram m/z 407 → 100 para o carvedilol e m/z 235 → 86 para a lidocaína. A acetonitrila foi selecionada como solvente orgânico em conjunto com o sal acetato de amônio. O gráfico de Pareto feito com o software Minitab ® foi utilizado para identificar os fatores significativos para incluir no CCD. Os gráficos de superfície e o teste de desejabilidade feitos com o software Statistica ® foram utilizados para definir as condições ótimas de extração, as quais foram 500 μL de plasma, 1268 μL de acetonitrila, 384 μL da solução de acetato de amônio em uma concentração de 5 mol/L e 10 min de centrifugação. Nesta condição foi possível obter uma recuperação de 93% para ambos enantiômeros do carvedilol. O método desenvolvido foi validado seguindo os guias da ANVISA (2012) e EMA (2011) e apresentou seletividade, linearidade na faixa de 0,5 a 100 ng/mL, sendo 0,5 ng/mL o limite inferior de quantificação, precisão e exatidão. Não foi observado efeito residual e efeito matriz, e os enantiômeros do carvedilol apresentaram estabilidade em plasma após submetidos a diferentes condições de armazenamento, preparo e análise. Finalmente, o método validado foi aplicado com sucesso em amostras de plasma de pacientes do HCFMRP/USP que foram submetidos a cirurgia bariátrica, assim o método proposto atingiu o objetivo inicial.