Padronização da técnica de extração do DNA com pelos de búfalos e análise da diversidade genética em um rebanho de búfalos utilizando marcadores microssatélite (SSRs)

• Autor(a) principal: Neves, Andressa Santana
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UTFPR (da Universidade Tecnológica Federal do Paraná (RIUT))
• Texto Completo: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/11352
• topic: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::ZOOTECNIA; Búfalos; Genética molecular; DNA; African buffalo; Molecular genetics

No Brasil o rebanho de bubalinos é relativamente baixo se comparada com outras culturas como por exemplo o rebanho de bovinos. Os maiores rebanhos de búfalos no Brasil estão situados na região norte. Conhecer a variabilidade genética em populações de búfalos de diferentes regiões é essencial para estabelecer um bom programa de melhoramento genético. Contudo, poucos estudos utilizando marcadores moleculares em búfalos foram realizados. Todavia, existem poucos trabalhos que fazem uso de tecidos diferentes para obter o DNA, material fundamental para realizar este tipo de estudo. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi realizar a padronização da extração de DNA, para posteriormente fazer a análise de diversidade genética com os marcadores microssatélites. Os marcadores microssatélites que foram utilizados são multialélicos e polimórficos, sendo eficientes na detecção de polimorfismos moleculares. Foram utilizados 30 animais para realização da extração do DNA genômico total, sendo que foram necessários realizar o teste de 3 protocolos diferentes para a padronização da extração, sendo eles; protocolo com sangue bovino, asa de abelha e 2 animal tissue. Em seguida foram realizadas padronizações de reações de PCR, para verificar a melhor temperatura de anelamento dos primers microssatélites. Para a padronização da extração o melhor protocolo foi o 2 animal tissue. As reações de PCR foram realizadas através de touchdown de 55 a 60°C, amplificados em gel de agarose metaphor. Os dados obtidos através da genotipagem de três marcadores moleculares do tipo microssatélites foram analisados pelo programa Darwin, separando em dois grupos diferentes, demostrando que os animais usados são geneticamente diferentes. Os valores de PIC foram 0,5732 para o loco BL41, 0,4786 para IDVGA 53 e 0,5149 para CSSM054, se mestrando ser um marcador eficiente para detectar polimorfismo. Entretanto, um número maior de marcadores microssatélites deverá ser utilizado para verificar a diversidade genética existente entre o conjunto de búfalos avaliados, pois o número de marcadores ainda é considerado baixo para estimar a variabilidade genética que possa de fato existir entre os genótipos.