Quantificação dos corpúsculos lipídicos, das enzimas formadoras de eicosanoides e de seus produtos na infecção natural pelo Dengue vírus

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Oliveira, Eneida Santos de
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34403
Resumo: O curso clínico da dengue é influenciado por múltiplos fatores. Nesse contexto, o processo inflamatório e sua regulação desempenham um importante papel no prognóstico da dengue. Os eicosanoides tem considerável influência sobre a regulação de muitos mecanismos inflamatórios envolvidos em várias doenças. No entanto, poucos estudos analisaram o papel dessas moléculas durante a infecção pelo Dengue vir22us (DENV). Para quantificar as moléculas envolvidas nas principais vias produtoras de eicosanoides - a via da ciclooxigenase (COX) e da lipooxigenase (LOX) - durante a dengue, foram coletadas amostras de sangue de participantes com dengue sem sinais de alarme e não infectados. Foram quantificados os níveis plasmáticos de tromboxano A2 (TXA2), prostaglandina E2 (PGE2) e leucotrieno B4(LTB4), bem como os níveis de mRNA de tromboxano A2 sintase (TXA2S), prostaglandina E2 sintase (PGE 2S), leucotrieno A4 hidrolase (LTA4H), ciclooxigenase-2 (COX-2) e 5-lipoxigenase (5-LOX) em leucócitos do sangue periférico. Além disso, como os corpúsculos lipídicos são organelas envolvidas na síntese de eicosanoides, medimos seus níveis em leucócitos do sangue periférico e também a porcentagem de monócitos vacuolados na circulação sanguínea de indivíduos infectados por DENV, bem como a carga viral. Dos 40 voluntários incluídos neste estudo, 12 voluntários não infectados foram negativos nos testes RT-qPCR, ELISA NS1 e também ELISA IgM. Os 28 voluntários restantes apresentaram sintomas de dengue e foram positivos em pelo menos um de três testes utilizados (17 foram positivos usando RT-qPCR, 20 foram positivos usando ELISA NS1 e 16 foram positivos em ELISA IgM). Devido à grande variação de dias de sintomas relatados pelos participantes (1-12 dias de sintomas), eles foram divididos em dois grupos de acordo com a presença e ausência de IgM. Nossos resultados mostraram que a infecção pelo DENV aumenta os níveis de TXA2 em indivíduos IgM positivos. Observamos também que os leucócitos do sangue periférico não são a fonte dos níveis aumentados de TXA2 na dengue, uma vez que a expressão do mRNA das enzimas COX-2 e TXA2S estava diminuída no grupo IgM positivo. Além disso, os níveis de corpúsculo lipídico estavam aumentados em monócitos no grupo IgM negativo, mesma fase onde se observou aumento de vacuolização em monócitos e elevada carga viral. Devido ao conhecido papel vaso constritor e de agregação plaquetária do TXA2, essa molécula parece desempenhar um papel protetor contra o desenvolvimento dos sintomas graves da dengue, enquanto os corpúsculos lipídicos parecem estar envolvidos na replicação viral em monócitos.
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spelling Oliveira, Eneida Santos deAlves, Érica Alessandra RochaSantos, Luciana Lara dosSilva, Carlos Eduardo CalzavaraSilva, Carlos Eduardo Calzavara2019-07-24T17:41:35Z2019-07-24T17:41:35Z2018OLIVEIRA, Eneida Santos de. Quantificação dos corpúsculos lipídicos, das enzimas formadoras de eicosanoides e de seus produtos na infecção natural pelo Dengue vírus. 2018. 93 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)-Instituto René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Belo Horizonte, 2018.https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34403O curso clínico da dengue é influenciado por múltiplos fatores. Nesse contexto, o processo inflamatório e sua regulação desempenham um importante papel no prognóstico da dengue. Os eicosanoides tem considerável influência sobre a regulação de muitos mecanismos inflamatórios envolvidos em várias doenças. No entanto, poucos estudos analisaram o papel dessas moléculas durante a infecção pelo Dengue vir22us (DENV). Para quantificar as moléculas envolvidas nas principais vias produtoras de eicosanoides - a via da ciclooxigenase (COX) e da lipooxigenase (LOX) - durante a dengue, foram coletadas amostras de sangue de participantes com dengue sem sinais de alarme e não infectados. Foram quantificados os níveis plasmáticos de tromboxano A2 (TXA2), prostaglandina E2 (PGE2) e leucotrieno B4(LTB4), bem como os níveis de mRNA de tromboxano A2 sintase (TXA2S), prostaglandina E2 sintase (PGE 2S), leucotrieno A4 hidrolase (LTA4H), ciclooxigenase-2 (COX-2) e 5-lipoxigenase (5-LOX) em leucócitos do sangue periférico. Além disso, como os corpúsculos lipídicos são organelas envolvidas na síntese de eicosanoides, medimos seus níveis em leucócitos do sangue periférico e também a porcentagem de monócitos vacuolados na circulação sanguínea de indivíduos infectados por DENV, bem como a carga viral. Dos 40 voluntários incluídos neste estudo, 12 voluntários não infectados foram negativos nos testes RT-qPCR, ELISA NS1 e também ELISA IgM. Os 28 voluntários restantes apresentaram sintomas de dengue e foram positivos em pelo menos um de três testes utilizados (17 foram positivos usando RT-qPCR, 20 foram positivos usando ELISA NS1 e 16 foram positivos em ELISA IgM). Devido à grande variação de dias de sintomas relatados pelos participantes (1-12 dias de sintomas), eles foram divididos em dois grupos de acordo com a presença e ausência de IgM. Nossos resultados mostraram que a infecção pelo DENV aumenta os níveis de TXA2 em indivíduos IgM positivos. Observamos também que os leucócitos do sangue periférico não são a fonte dos níveis aumentados de TXA2 na dengue, uma vez que a expressão do mRNA das enzimas COX-2 e TXA2S estava diminuída no grupo IgM positivo. Além disso, os níveis de corpúsculo lipídico estavam aumentados em monócitos no grupo IgM negativo, mesma fase onde se observou aumento de vacuolização em monócitos e elevada carga viral. Devido ao conhecido papel vaso constritor e de agregação plaquetária do TXA2, essa molécula parece desempenhar um papel protetor contra o desenvolvimento dos sintomas graves da dengue, enquanto os corpúsculos lipídicos parecem estar envolvidos na replicação viral em monócitos.The clinical course of dengue is influenced by multiple factors. In this context, the inflammatory process and its regulation play a major role in dengue prognosis. The eicosanoid molecules have considerable influence upon the regulation of many inflammatory mechanisms involved in the pathogenesis of several diseases. However, few studies have analysed the role of eicosanoids during Dengue virus (DENV) infection. In order to quantify molecules involved in the cyclooygenase (COX) and lipooxygenase (LOX) pathways during dengue, blood samples were collected from patients with mild dengue and plasma levels of thromboxane A2 (TXA2), prostaglandin E 2 (PGE2) and leukotriene B4 (LTB4) and also mRNA levels of thromboxane A2 synthase (TXA2S), prostaglandin E2 synthase (PGE2S), leukotriene A4 hydrolase (LTA4H), cyclooxygenase-2 (COX-2) and 5-lipoxygenase (5-OX) were analysed. Moreover, as lipid bodies (LB) are organelles engaged in the synthesis of eicosanoids, we measured their levels in peripheral blood leukocytes and also the percentage of vacuolated monocytes in the blood circulation of DENV-infected individuals, as well as the DENV load. From 40 volunteers enrolled in this study, 12 healthy volunteers were negative in RT-qPCR, ELISA NS1 and also ELISA IgM tests. The remaining 28 volunteers presented dengue symptoms and were positive at least in one of the three tests used (17 were positive using RT-qPCR, 20 were positive using ELISA NS1 and 16 were positive in ELISA IgM). Due to the wide variation of days of symptoms reported by the volunteers (1-12 days of symptoms), they were divided into two groups according to the presence and absence of IgM. Our results showed that DENV infection increases the levels of TXA2 in IgM-positive individuals. We also observed that peripheral blood leukocytes are not the source of increased levels of TXA 2 in dengue, since mRNA expression of the COX-2 and TXA2S enzymes was decreased in the IgM positive group. In addition, lipid bodies levels were increased in monocytes in the negative IgM group, the same phase where increased vacuolization was observed in monocytes and high viral load. Due to the well-established vasoconstrictor and platelet aggregation role of TXA2, this seems to play a protective role against the development of severe dengue symptoms. Moreover, LB may be involved in viral replication in monocytes.CAPESFundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.porDengue virusEicosanoidesGotículas LipídicasInflamaçãoPatogeniaTXA2Corpúsculo lipídicoDengue virusEicosanoidsTXA 2PathogenesisInflammationLipid bodiesQuantificação dos corpúsculos lipídicos, das enzimas formadoras de eicosanoides e de seus produtos na infecção natural pelo Dengue vírusinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis2018Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, BrasilBelo Horizonte/MGPrograma de Pós-graduação em Ciências da Saúdeinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-83082https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/34403/1/license.txt9193a7c197bc67acd023525e72a03240MD51ORIGINALT_2018_EneidaOliveira.pdfT_2018_EneidaOliveira.pdfapplication/pdf32398842https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/34403/2/T_2018_EneidaOliveira.pdfdbbcdfb3d65e9346de16e865d1864b1fMD52TEXTT_2018_EneidaOliveira.pdf.txtT_2018_EneidaOliveira.pdf.txtExtracted texttext/plain44503https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/34403/3/T_2018_EneidaOliveira.pdf.txta50232140276cfd7599b36e064c727ebMD53icict/344032019-09-09 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