Pré-validação do ensaio de potência in vitro para veneno botrópico e soro antibotrópico

• Autor(a) principal: Nundes, Renata Norbert Costa
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/35613
• topic: Veneno Botrópico; Soro Antibotrópico; Ensaio de citotoxicidade; Método alternativo; Pré-validação; Bothropic Venom; Bothropic Antivenom; Cytotoxicity Assay; Alternative Method; Pre-Validation; Bothrops; Venenos de Serpentes; Antivenenos; Testes Imunológicos de Citotoxicidade; Alternativas aos Testes com Animais

Acidentes com animais peçonhentos são a segunda causa de intoxicação em humanos no Brasil. Na América Central e do Sul a incidência destes acidentes é predominantemente por serpentes do gênero Bothrops. No Brasil em 2015 foram notificados 24.467 acidentes dentre os quais 73,5% causados pelo gênero Bothrops. No Instituto Nacional de Controle de qualidade em Saúde (INCQS) são utilizados aproximadamente 5.500 camundongos/ano somente para os ensaios de potência de antivenenos botrópico e crotálico, portanto é importante o desenvolvimento de uma metodologia alternativa ao uso de animais. O INCQS possui um grupo de pesquisadores engajados na busca por métodos alternativos ao uso de animais desde 1999. O objetivo deste trabalho é pré-validar um método alternativo in vitro para a determinação da potência do veneno botrópico e do soro antibotrópico. O princípio da técnica proposta baseia-se na propriedade do veneno botrópico provocar efeito citotóxico em células Vero de rim de macaco e sua inibição pelo antiveneno. A concentração de células aderidas pode ser avaliada pela coloração e posterior eluição do corante, sendo a densidade óptica do eluato do corante diretamente proporcional à concentração de células vivas. Um método alternativo validado deve passar por todas as fases de desenvolvimento, pré-validação, validação e revisão por especialistas conferindo credibilidade através dos Centros de Validações. A pré-validação é importante antes da realização de um estudo formal de validação em larga escala, deve envolver a otimização e padronização do protocolo, a identificação de qualquer problema inesperado, incluindo aqueles relacionados à análise dos resultados, bem como uma avaliação inicial da transferibilidade interlaboratorial do método. Este estudo pretende pré-validar uma metodologia mais eficiente do que a recomendada atualmente e que é mais rápida, visando reduzir o custo através da redução de insumos, materiais utilizados e tempo para liberar lotes de veneno e antiveneno. O método proposto é capaz de quantificar o efeito citotóxico de metaloproteases e fosfolipases A2, principais toxinas presentes no veneno de B. jararaca. A potência in vitro do Veneno Botrópico de Referência foi de 4,18 μg/mL e para o Soro Antibotrópico de Referência foi de 0,126 μl / mL. O ensaio de potência do Veneno Botrópico teve o coeficiente de variação geométrico (gCV) interensaios de 27,79% e o gCV intraensaios de 14,76%. Para a potência do Soro Antibotrópico de Referência o resultado obtido de gCV intraensaio foi 7,52% e o gCV interensaio foi 7,59%. O método apresentou linearidade válida (p>0,05) para todos os ensaios. Os resultados obtidos demonstram que o método proposto apresenta precisões intraensaios e interensaios conformes e é um bom candidato a método alternativo ao ensaio murino, tanto para a determinação da potência do veneno botrópico quanto do soro antibotrópico.