Identificação de Neisseria meningitidis em portadores assintomáticos através da técnica de PCR em tempo real

• Autor(a) principal: Ferreira, Ítalo Eustáquio
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/30491
• topic: Fenilcetonúria; Genótipo; Fenótipo; Mutações; Neisseira meningitidis; Colonização; Vacina; Doença meningocócica; Neisseria meningitidis; Reação em cadeia da Polimerase em Tempo Real; Portador sadio; Phenylketonurias; Genotype; Phenotype; Mutation; Neisseria meningitidis; Colonization; Vaccines; Meningococcal Infections; Neisseria meningitidis; Real-Time Polymerase Chain Reaction; Carrier State

INTRODUÇÃO: A cultura é considerada a metodologia padrão ouro para a identificação de N. meningitidis. Entretanto, o emprego de técnicas moleculares, como a PCR em tempo real (qPCR) tem melhorado a capacidade de detecção do meningococo. Nos estudos em portadores, a qPCR empregando o gene sodC como alvo tem sido indicada. OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo avaliar a técnica de qPCR (sodC) para a identificação de N. meningitidis, a partir de material de orofaringe mantido em meio de transporte STGG, coletado de portadores assintomáticos. MATERIAL E MÉTODOS: O ensaio da qPCR foi padronizado e validado com critérios locais e a metodologia comparada com os resultados obtidos previamente a partir da cultura. Foram utilizadas um total de 1200 amostras de material de orofaringe mantidas em meio de transporte STGG a -70°C. Os ensaios da qPCR foram realizados empregando o cycle threshold (Ct) padrão (Ct≤35) e o Ct≤38 validado neste estudo. RESULTADOS: Através da qPCR (Ct≤35) foram obtidas um total de 84 (7%) amostras positivas (Ct médio= 30,4 ± 3.1) em comparação com a cultura (n=59; 4,9%), enquanto a qPCR (Ct≤38) permitiu a identificação de 99 (8,3%) amostras positivas (Ct médio= 35,6 ± 5,1). Apenas uma amostra positiva na cultura não foi identificada através da qPCR (Ct≤38). A concentração de DNA na etapa prévia de extração melhorou a capacidade de detecção de amostras positivas na qPCR. A caracterização dos genogrupos de N. meningitidis através da qPCR mostrou a presença de amostras não-grupáveis. CONCLUSÔES: Os resultados obtidos neste estudo mostram que a qPCR (Ct≤38) é uma alternativa eficaz para a identificação e caracterização de N. meningitidis a partir do meio de transporte STGG, devendo ser empregada em associação à cultura nos estudos de portadores de N. meningitidis.