Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex

• Autor(a) principal: Poroca, Diogo da Rocha
• Data de Publicação: 2009
• Outros Autores: Lima, Andrea Santos, Lima, Juliana Falcão de Araújo, Cruz, Heidi Lacerda Alves da, Montenegro, Rosana de Albuquerque, Melo, Fábio Lopes de, Schindler, Haiana Charifker, Montenegro, Lílian Maria Lapa
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/26308
• topic: Micobactérias; PCR multiplex; IS6110; dnaJ; hsp65; Mycobacteria; Multiplex PCR; IS6110; dnaJ; hsp65; Proteínas Bacterianas / análise; Proteínas Bacterianas / genética; Técnicas de Tipagem Bacteriana; Chaperonina 60 / análise; Chaperonina 60 / genética; DNA bacteriano / análise; Mycobacterium / classificação; Mycobacterium / genética; Reação em Cadeia da Polimerase / métodos

O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons de 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias.