Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex

• Autor(a) principal: Poroca,Diogo da Rocha
• Data de Publicação: 2009
• Outros Autores: Lima,Andrea Santos, Lima,Juliana Falcão de Araújo, Cruz,Heidi Lacerda Alves da, Montenegro,Rosana de Albuquerque, Melo,Fábio Lopes de, Schindler,Haiana Charifker, Montenegro,Lílian Maria Lapa
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical
• Texto Completo: http://old.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0037-86822009000600020
• topic: Micobactérias; PCR multiplex; IS6110; dnaJ; hsp65

O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons de 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias.