Caracterização polifásica e do biofilme de linhagens de stenotrophomonas maltophilia isoladas de uma indústria de imunobiológicos

• Autor(a) principal: Lage, Rebeca Vitória da Silva
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60876
• topic: Stenotrophomonas maltophilia; Caracterização polifásica; Controle de Qualidade; Biofilmes; Stenotrophomonas maltophilia; Quality control; Polyphasic characterization; Biofilm

O conhecimento da microbiota associada a processos produtivos de diversas fontes é estratégico para a adoção de medidas preventivas ou corretivas, assim como na avaliação dos riscos associados aos processos. Alterações nesta microbiota podem indicar desvios das especificações estabelecidas, que podem levar ao descarte de produtos. Microrganismos produtores de biofilme, como a bactéria Stenotrophomonas maltophilia, adquirem maior resistência à ação de agentes físicos e químicos, o que pode contribuir para a prevalência desses patógenos em alguns ambientes. S. maltophilia é um patógeno humano oportunista, produtor de biofilme e frequentemente isolado em ambientes da indústria farmacêutica. Este trabalho teve como objetivo a caracterização polifásica de cepas de S. maltophilia isoladas de uma unidade farmacêutica por meio de técnicas fenotípicas e moleculares, assim como a avaliação da formação de biofilme e sua tolerância frente a desinfetantes. Duzentas e setenta linhagens previamente identificadas como S. maltophilia pelo VITEK®2 foram avaliadas. Quarenta linhagens de diferentes perfis fenotípicos foram selecionadas e submetidas a identificação por Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS), análise do gene 16S e 23S rRNA. MALDI-TOF MS identificou 37 (92,5%) cepas como S. maltophilia, e três (7,5%) cepas não foram identificadas. O sequenciamento do 16S rRNA foi capaz de identificar 39 (97,5%) linhagens como Stenotrophomonas spp., ou seja, apresentou como resultado mais de uma espécie dentro gênero Stenotrophomonas como possibilidade. Uma (2,5%) linhagem foi identificada em nível de espécie como Luteimonas huabeiensis. A PCR espécie-específica utilizando o gene 23S rRNA produziu resultado positivo para 39 (97,5%) linhagens. Entretanto, após o sequenciamento, duas linhagens foram identificadas como Stenotrophomonas rhizophila, mostrando resultados falsopositivos. Por meio da tipificação por Multi-locus sequence typing (MLST) foram descritos 33 alelos novos e identificados 17 ST distintos, sendo 8 novos no banco de dados. Já o ERIC PCR (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus - Polymerase Chain Reaction) identificou 35 perfis diferentes. Das 37 linhagens identificadas como S. maltophilia, 36 (97,3%) apresentaram biofilme classificado como forte ou moderadamente aderentes, no qual apenas o hipoclorito de sódio em concentrações ≥1,00%, foi capaz de reduzir 100,00% do biofilme produzido. Não foi observada capacidade agregativa em nenhuma das linhagens estudadas. Todas a linhagens apresentaram sensibilidade a minociclina, levofloxacina e sulfametoxazol-trimetoprim. Conclui-se que o MALDI-TOF MS provou ser uma metodologia satisfatória para a identificação de linhagens de S. maltophilia, mas a expansão do banco de dados é necessária para a identificação de outras espécies do gênero. O sequenciamento do gene 16S rDNA mostrou baixa resolução para diferenciação de espécies do gênero Stenotrophomonas devido a estrita relação genética. A PCR utilizando o gene 23S rRNA para identificação de S. maltophilia foi capaz de diferenciar o gênero, mas não foi capaz de diferenciar S. maltophilia de S. rhizophila. O ERIC-PCR e o MLST demonstraram ser ferramentas úteis para o rastreamento de fontes microbianas da S. maltophilia em instalações farmacêuticas.