Perfil de expressão de microRNAs em testículos de hamster dourado Mesocricetusauratus infectados pelo Vírus Zika

• Autor(a) principal: Franco Neto, Walter Felix
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Digital do Instituto Evandro Chagas (Patuá)
• Texto Completo: https://patua.iec.gov.br/handle/iec/6688
• topic: Zika virus / patogenicidade; Infecção por Zika virus; MicroRNAs / genética; Mesocricetus / anatomia & histologia; Testículo / virologia

O Vírus Zika (VZIK) é vírus de grande importância para saúde publica, foi responsável por um surto no Brasil entre 2015- 2016, com vários casos de síndrome congênita pelo VZIK, além de estar associado a caso de infertilidade em homens. Diante disso há a necessidade de entender as sintomatologias, as formas de prevenção e tratamento para infecção causada pelo VZIK. Estudo recentes demonstraram que os miRNAs possuem papeis importantes durante infecções virais, podendo agir a favor da replicação viral ou favorecendo a regulação do sistema imunológico do hospedeiro. Este estudo identificou alguns microRNAs envolvidos em infecção pelo VZIK em testículos de Hamsters dourados (Mesocricetusauratus) infectados. Para este estudo foram selecionadas amostras de testículos de hamster dourados infectados pela via intraperitoneal com VZIK, em seguida foi extraído o RNA total das amostras através do robô Maxwell 16 lev (Promega, EUA), posteriormente foram sequenciadas no aparelho nextseq 550 (Illumina, EUA). As amostras de mRNA foram quantificadas pelo método de RT-qPCR com os alvos da maquinaria de produção de miRNAs (DICER, DROSHA, DGCR8, argonautas 1-4) e o controle endógeno (B-actina), e também, foi quantificado a carga viral pelo método de RT-qPCR. As sequencias foram processados nos programas trimmomatic em seguida, a qualidade das sequencias foram analisadas no programa fastQC, e por fim as sequencias foram mapeadas no programa HISAT2, contadas com feature-counts e analisada a expressão com o programa dseq2. Os gráficos e as analises estatísticas foram feitas no programa graphprism 7. Os resultados obtidos demonstraram que a via DROSHA-independente da produção de miRNAs foram mais significantes, a carga viral teve seu pico de infecção com 3dpi seguido de declínio até o ultimo dia da cinética do estudo (30dpi). Foram encontrados 1971 miRNAs, nas amostras mapeadas, dessas, 7 possuem grande importância para regulação de processos celular, que incluem regulação de células-tronco espermatogonais (miRNA-322); Regulação da espermatogênese (miRNA-10, miRNA-34, miRNA-449); Regulação da apoptose (miRNA-15, miRNA-16) e Regulação de produção de esperma (miRNA-17). Inferimos que a produção dos miRNA durante a infecção do VZIK em testículos ocorre pela via não-canônica DICER-independente, resultado da modulação do vírus sobre o órgão do hospedeiro, além disso demonstramos que essa modulação pode ser diferente de outros arbovírus, que comumente apresentam a via canônica como produtora de miRNAs.