Structural characterization of proteins associated to autophagy

• Autor(a) principal: Simões, Ana Marisa Henriques Duarte
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/9691
• topic: Biologia molecular; Proteínas - caracterização

DOR (ou Tumor protein p53 inducible nuclear protein 2 - tp53inp2) é uma proteína bifuncional que atua no núcleo e no citosol. No núcleo DOR atua como um co-fator nuclear, liga-se e co-ativa no recetor da hormona da tiróide. No último, DOR desloca-se do núcleo para o citoplasma em situações de ativação da autofagia ou stress celular, localiza-se no autofagossoma e interage diretamente com as proteínas associadas à membrana do autofagossoma, LC3 e GATE16. A caraterização da interação entre a DOR e os seus parceiros e a relevância da DOR na autofagia é muito importante. A autofagia tem um papel importante no envelhecimento, morte celular, defesa contra agentes intracelulares patogénicos, doenças neurodegenerativas e tumorogenesis, o que demonstra a importância biológica e médica de estudar as proteínas envolvidas neste processo. A proteína de fusão NusA-DOR e os seus interatores, LC3 e GATE16, foram expressos em E.coli. Todas as proteínas foram purificadas por cromatografia de afinindade, seguida por cromatografia de exclusão molecular (DOR) ou por cromatografia de troca iónica (LC3 e GATE16). A estabilidade da DOR e a interação com os seus parceiros intracelulares foi analisada estruturalmente, através de ressonância plasmónica de superfície, circular dicroísmo e estabilidade térmica. Um péptido da DOR contendo o local de interação (região LIR) foi produzido para os ensaios de co-cristalização por difusão vapor. O péptido da DOR liga num sulco da LC3 numa conformação em gancho, dois importantes aminoácidos medeiam a interação com LC3, Trp35 e a Leu38. A conformação desta estrutura é diferente das outas estruturas conhecidas da LC3 com domínios LIR.