Funções celulares da proteína centrossomal humana TBCCD1: validação da interação com proteínas previamente identificadas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Veiga, Joaquim Maria Iglésias Pereira da Mota
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/42075
Resumo: Tese de mestrado, Bioquímica, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2019
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spelling Funções celulares da proteína centrossomal humana TBCCD1: validação da interação com proteínas previamente identificadasCentrossomaSatélites centriolaresTBCCD1OFD1Teses de mestrado - 2019Domínio/Área Científica::Ciências Naturais::Ciências QuímicasTese de mestrado, Bioquímica, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2019O centrossoma é o principal centro organizador de microtúbulos nas células animais. Este desempenha diversas funções celulares como a organização espacial do citoplasma e dos organelos, bem como na formação do fuso mitótico durante a divisão, na migração celular, no estabelecimento do eixo de polaridade intrínseco da célula “Núcleo-Centrossoma-Complexo de Golgi” e na ciliogénese. O nosso grupo tem-se focado no estudo da proteína centrossomal TBCCD1 (TBCC domain-containing protein 1) e nas funções que esta desempenha. Nos seus primeiros estudos, o nosso grupo desvendou um fenótipo característico quando a proteína TBCCD1 era depletada (Gonçalves, 2010). O mesmo determinou recentemente que a proteína TBCCD1 estabelecia uma vasta rede de interações com outras proteínas, após a realização de BioID (Camelo, 2015). Como tal, identificaram-se cerca de 82 proteínas pertencentes a este interatoma da TBCCD1. Nestas 82 proteínas, destacou-se um grupo de seis proteínas, devido a sua capacidade de estabelecerem interações entre si, bem como com as restantes proteínas deste interatoma da TBCCD1 (dados ainda não publicados). As proteínas reunidas nesse grupo são essencialmente proteínas codificadas por genes envolvidos em ciliopatias, isto é, doenças associadas a defeitos relacionados com a biogénese de cílios primários. Uma das proteínas associadas a ciliopatias encontrada neste grupo foi a proteína OFD1 (Oral-Facial-Digital-1). Esta proteína localiza-se principalmente na região distal do centríolo-mãe e nos satélites centriolares. A proteína é traduzida pelo gene ofd1 localizado no cromossoma X. Mutações deste gene levam à manifestação da síndrome Oral-Facial-Digital, que se caracteriza por anormalidade orais, dimorfismo facial e defeitos no sistema nervoso central (SNC) tais como microcefalias (Lopes, et al., 2011). Neste trabalho estudámos as interações entre a proteína TBCCD1 e a proteína OFD1 e a influência desta interação no posicionamento do centrossoma, e nos satélites centriolares. Diversos ensaios de depleção ou de sobre-expressão da proteína TBCCD1 foram realizados e, seguidamente, observados por imunofluorescência e immunoblotting, de modo a estudar o impacto que diferentes níveis fisiológicos da TBCCD1 teriam na proteína OFD1. Com este trabalho foi possível concluir que as proteínas TBCCD1 e OFD1 estabelecem algum tipo de relação, dado que, tanto nos ensaios de depleção ou de sobre-expressão de TBCCD1 se verifica uma diminuição da proteína OFD1. Também se concluiu que parece existir um intervalo de níveis fisiológicos da proteína TBCCD1 que, sendo ultrapassados, têm uma influência direta na proteína OFD1, provocando uma diminuição da mesma na célula. Por fim, foi ainda possível estabelecer a hipótese de que a proteína TBCCD1 estabelece uma interação com os complexos proteicos constituídos com a proteína OFD1 (Chevrier, et al., 2015), ou ainda que, possivelmente, a própria proteína TBCCD1 se associa a um dos complexos formados pela proteína OFD1.The centrosome is the main organizing center for microtubules in animal cells. It performs several cellular functions such as the spatial organization of the cytoplasm and organelles, as well as the formation of the mitotic spindle during division, cell migration, establishment of the intrinsic cell polarity axis "Nucleus-Centrosome-Golgi Complex" and in ciliogenesis. Our group has been focused on studying the centrosomal protein TBCCD1 (TBCC domain-containing human protein 1) and its functions. In our early studies, the group uncovered a characteristic phenotype when the TBCCD1 protein was depleted (Gonçalves, 2010). It was recently determined through BioID analysis that the TBCCD1 protein established a vast network of interactions with other proteins (Camelo, 2015). As such, about 82 proteins belonging to this TBCCD1 interatom were identified. Out of those 82 proteins, a group of six proteins was highlighted due to their ability to establish interactions among themselves, as well as with the remaining proteins of this TBCCD1 interatoma (data yet not published). The proteins included in this group are essentially proteins encoded by genes involved in ciliopathies, i.e., diseases associated with defects related to the biogenesis of primary cilia. One of these ciliopathy-associated proteins found in the referred group of interest was OFD1 (Oral-Facial-Digital-1). This protein is mainly located in the distal region of the mother centriole and centriolar satellites. The protein is transduced by the gene ofd1 located on the X chromosome. Mutations of this gene lead to the manifestation of the Oral-Facial-Digital syndrome, which is characterized by oral abnormalities, facial dimorphism and central nervous system (CNS) defects such as microcephaly (Lopes, et al., 2011). In this work we studied the interactions between the TBCCD1 protein and the OFD1 protein and the influence of this interaction on centrosome position and on the centriolar satellites. Several assays of depletion or of overexpression of the TBCCD1 protein were performed and then observed by immunofluorescence and immunoblotting, in order to study the impact that different physiological levels of TBCCD1 would have on the OFD1 protein. This work allowed us to conclude that the TBCCD1 and OFD1 proteins establish some type of relationship, since in both TBCCD1 depletion or overexpression assays occurs a decrease of OFD1 protein. It was also concluded that there appears to be a range of physiological levels of the protein TBCCD1, which if overtaken has a direct influence on the OFD1 protein, causing a decrease of the later in the cell. At last, it was also formulated the hypothesis that the TBCCD1 protein interacted with protein complexes constituted with OFD1 protein (Chevrier, et al., 2015), or even possibly the TBCCD1 protein itself associates with one of the complexes formed by the OFD1 protein.Soares, Maria Helena AntunesMarinho, Helena Susana Pappámikail da Costa,1958-Repositório da Universidade de LisboaVeiga, Joaquim Maria Iglésias Pereira da Mota2022-12-20T01:30:26Z201920192019-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/42075TID:202482146porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T16:41:48Zoai:repositorio.ul.pt:10451/42075Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:55:12.117836Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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