Reprogramação da diferenciação por miRNAs dependentes de CDX2

• Autor(a) principal: Moreira, Lúcia Margarida Ferreira
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/7997
• topic: Neoplasias; Cólon; MicroRNAs; Reprogramação

No trato gastrointestinal, SOX2 e CDX2 são os fatores de transcrição chave para a diferenciação dos tecidos, particularmente esófago, estômago e intestino. Na parte anterior o SOX2 tem um papel ativo na regulação da diferenciação da mucosa esofágica e gástrica, enquanto na parte posterior é o CDX2 que desempenha um papel essencial na diferenciação intestinal. Sabe-se que a expressão de SOX2 e CDX2 é mutuamente exclusiva, em tecidos normais. Para além disso, experiências em modelos animais mostraram que quando se diminui a expressão de SOX2 ocorre um aumento de CDX2 e vice-versa. As células com perda total de expressão do gene CDX2 têm um aumento da expressão do gene SOX2, demonstrando uma interligação na expressão destas proteínas. Uma vez que não é conhecida atividade repressora de CDX2 tentou-se estudar uma regulação negativa mediada por microRNAs, Recorrendo a um array de 754 microRNAs foram selecionados 106 que obtiveram um Ct<32 tendo sido normalizados para os 3 housekeepings, e para a média de todos os microRNAs. Para obter uma lista mais restrita e possivelmente mais robusta de microRNAs diferencialmente expressos nas 3 linhas celulares em estudo, selecionamos os miRNAs que apareceram diferencialmente expressos quando a normalização foi feita utilizando a média e pelo menos um dos 3 housekeepings. Obtivemos uma lista de 10 potenciais microRNAs de interesse regulados por CDX2. Com recurso à base de dados miRanda e pesquisa bibliográfica fomos investigar quais desses miRNAs poderiam regular o mRNA SOX2. Selecionamos os let-7d, miR-27b e miR-19a para validação. O miR-19a e miR-let7d não foram validados, em contrapartida o miR-27b demonstrou um aumento significativo da sua expressão na linha que expressa CDX2 o que pode significar a sua regulação por CDX2. Futuramente este microRNA será estudado quanto ao seu efeito no mRNA de SOX2.