Novas estratégias de purificação de microRNAs usando líquidos iónicos

• Autor(a) principal: Rodrigues, Inês Isabel Dias
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/10075
• topic: Ácidos Nucleicos; Cromatografia; Líquidos Iónicos; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas::Ciências Biomédicas

As terapias baseadas em ácidos nucleicos têm tido cada vez mais destaque no tratamento de diversas doenças, nomeadamente em doenças autoimunes, oncológicas e neuro-degenerativas. No entanto, para a utilização destas biomoléculas é necessário que estas estejam integras, puras e que mantenham a sua atividade biológica. Os líquidos iónicos (LIs) são um grupo de sais orgânicos com bastante potencial na purificação de ácidos nucleicos pois apresentam características físico-químicas muito próprias e grande versatilidade para manipular o design do catião/anião. Acrescendo a este facto, alguns LIs são considerados “green solventes”, tornando-se assim uma alternativa mais ecológica aos solventes orgânicos normalmente utilizados. O principal objetivo deste trabalho é investigar a aplicabilidade da cromatografia líquida preparativa, com recurso a uma matriz macroporosa funcionalizada com líquidos iónicos, na purificação de ácidos nucleicos. Para concretizar este objetivo foram extraídos três tipos diferentes de amostra (ARN de baixo peso molecular; ADN genómico e ARN de baixo peso molecular; ADN genómico, ARN ribossomal e ARN de baixo peso molecular) a partir da Escherichia coli DH5a que foram utilizados em ensaios de ligação em modo “batch” onde diferentes líquidos iónicos estavam imobilizados em sílica (S-Sil), usada como fase estacionária. Com estes ensaios foi possível avaliar a capacidade dos diferentes tipos de S-Sils (S-SilPrBenzCl; S-SilPrMImCl; S-SilPrNEt3Cl; S-SilPrMet2ButCl; e S-SilPrN(C8)3Cl) para reconhecer e ligar às diferentes espécies de ácidos nucleicos. Estes ensaios foram realizados repetidamente de modo a ser possível comprovar a sua reprodutibilidade e resistência à regeneração. De uma forma geral os S-Sils demonstraram a possibilidade de promover diversas interações, nomeadamente iónicas e hidrofóbicas, com as diferentes espécies de ácidos nucleicos, dando, no entanto, destaque para S-SilPrNEt3Cl e S-SilPrMet2ButCl uma vez que demonstraram ser ligandos promissores para a aplicação na purificação de ácidos nucleicos. Após os referidos ensaios foi realizada a funcionalização da matriz cromatográfica macroporosa como ligando mais promissor, SilPrNEt3Cl, para a realização dos ensaios de purificação de ADN genómico, ARN ribossomal e ARN de baixo peso molecular. No final, foi possível confirmar a separação das três espécies de ácidos nucleicos num único ensaio cromatográfico.