Desenvolvimento de metodologias de biologia molecular para a detecão de carne de cavalo (Equus caballus) em produtos cárneos

• Autor(a) principal: Meira, Liliana de Castro
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10316/28449

A identificação de espécies em alimentos é cada vez mais importante para avaliar a sua autenticidade, principalmente nos produtos cárneos. O consumidor tem direito a uma escolha informada, uma vez que esta pode ser um reflexo de um estilo de vida, práticas religiosas ou problemas de saúde. Assim, uma rotulagem correta e verdadeira é fundamental para manter o consumidor informado sobre a identidade e qualidade dos produtos alimentares que está a adquirir. Recentemente, surgiu um escândalo de dimensões internacionais, relacionado com a adição de carne de cavalo não declarada em alimentos processados. Contudo, a presença desta espécie não representa um risco para a saúde do consumidor, a não ser que a carne de cavalo contenha fenilbutazona. Esta droga não é permitida para o consumo humano, uma vez que pode causar doenças sanguíneas, como a anemia aplástica. Animais que forem medicados com esta droga não podem ser utilizados para consumo, uma vez que não é possível definir um limite máximo de resíduo para este medicamento veterinário. Todavia, a presença não declarada desta espécie representa uma fraude alimentar. Assim, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de técnicas de PCR específicas e sensíveis para a identificação de carne de cavalo em produtos alimentares. Inicialmente foi desenvolvida a técnica de PCR qualitativa, onde foram estabelecidos limites de deteção (LOD) absolutos e relativos. A sensibilidade obtida para o LOD absoluto foi de 1pg e 10 pg para ADN de cavalo cruo e autoclavado, respetivamente. Relativamente ao LOD relativo também se alcançaram limites distintos para misturas binárias cruas e processadas, de 0,001% e 0,01%, respetivamente. Esta técnica foi aplicada a um conjunto de 77 amostras adquiridas antes e depois do “escândalo da carne de cavalo”, sendo que 2 revelaram a presença da espécie. Posteriormente, de forma a confirmar e quantificar a espécie de cavalo, recorreu-se à técnica de PCR em tempo real com o corante EvaGreen e análise de melting. Atingiu-se um limite de deteção absoluto de 0,1 pg de ADN de cavalo cruo e autoclavado, e um LOD relativo de 0,0001% de carne de cavalo em misturas cruas e processadas. Por fim, foi construído e validado o modelo normalizado de quantificação com base no método ΔCt, tendo-se passado à sua aplicação nas amostras que amplificaram positivamente a espécie de cavalo na PCR qualitativa. O método permitiu confirmar a presença de ADN de cavalo, no entanto os valores baixos encontrados indicaram que a presença de cavalo deverá ser resultado de contaminação cruzada e não de possível fraude. Pode-se concluir que neste trabalho foram desenvolvidas ferramentas úteis e eficazes para a deteção de adulterações em produtos cárneos com carne de cavalo.