Development of lyophilized reference stock cultures for quality control in microbiological analysis

• Autor(a) principal: Mendes, Ana Rita Chaves Botelho Vaz
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/16752
• topic: Biotecnologia alimentar; Conservação dos alimentos; Análise microbiológica; Microorganismos; Liofilização; Criopreservação

No final de 2014 foi publicada a norma ISO 11133 que obriga à realização de testes de performance em todos os lotes de meio produzidos, recorrendo ao uso de microrganismos de referência específicos, com um nível de inóculo estabelecido. A liofilização é um processo de secagem de culturas microbianas, e que permite a sua preservação por largos períodos de tempo, sem ser necessária refrigeração. Os efeitos de três meios crioprotetores diferentes (skim milk + 10% sacarose, nutrient broth nº2 + 20% glicerol, e sacarose 10%) na sobrevivência à liofilização de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes e Salmonella enterica serogrupo Typhimurium; o acompanhamento da concentração celular de S. aureus ao longo do tempo, depois de ter sido liofilizado com skim milk + 10% sacarose; e ainda o estudo da estabilidade de E. coli e S. aureus, depois de liofilizados e armazenados à temperatura ambiente, foram investigados. E. coli, S. aureus e L. monocytogenes foram liofilizadas com skim milk + 10% sacarose; E. coli e S. aureus foram liofilizadas com nutrient broth nº2 + 20% glicerol; e Salmonella Typhimurium e E. coli foram liofilizadas com sacarose 10%. Terminadas as liofilizações dos estudos de viabilidade, cada amostra foi reidratada e inoculada em PCA. Para o acompanhamento da concentração celular de S. aureus, com intervalos regulares ao longo do tempo, as amostras foram reidratadas e inoculadas em PCA e BP egg yolk. Para estudar a estabilidade de E. coli e S. aureus as amostras foram reidratadas e inoculadas em PCA e no respetivo meio seletivo, com intervalos regulares ao longo do tempo. Skim milk + 10% sacarose é o melhor meio protetor dos três usados. Das bactérias gram-positivas testadas, L. monocytogenes é a mais resistente, com uma redução na sua viabilidade virtualmente nula; das gram-negativas, a Salmonella Typhimurium foi a que obteve melhores resultados, com a redução de 1 Log. Naturalmente, as gram-positivas têm uma melhor capacidade de sobrevivência à liofilização por causa da composição da sua parede celular, rica em peptidoglicanos, e isso foi comprovado nos testes feitos. No estudo da estabilidade de S. aureus, a sua concentração celular manteve-se estável ao longo do tempo, acima dos 6 Log ufc/200 μl. Nos estudos em que a estabilidade de E. coli e S. aureus armazenados à temperatura ambiente foi avaliada, comprovou-se que culturas microbianas liofilizadas necessitam de refrigeração para manter a viabilidade. Com este trabalho deu-se início à investigação necessária para a elaboração de um protocolo com o intuito de produzir culturas stock de referência liofilizadas, com o nível de inóculo necessário, para aplicação futura em análises microbiológicas.