MLST e estudo genético da resistência a antibióticos e factores de virulência em Enterococcus spp. isolados de amostras fecais de douradas (Sparus aurata)

• Autor(a) principal: Barros, Joana Alberta Ribeiro
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/716
• topic: Enterococcus; “Multilocus Sequence Typing”; Antibióticos (Glicopéptidos); Vancomicina (VRE); Genótipo vanA; Genes de virulência; Glycopeptides; Vancomycin-resistant enterococci (VRE); Multilocus Sequence Typing; VanA-containing enterococci; Virulence factors

O reconhecimento da resistência antimicrobiana, como um fenómeno emergente em saúde pública, tem constituído um problema a nível mundial. A comunidade científica constatou a necessidade de realizar a avaliação da susceptibilidade aos antibióticos em “bactérias indicadoras” de diversas origens, como medida para combater o aumento da resistência antimicrobiana. Enterococcus spp. são bactérias comensais que colonizam a microbiota intestinal da maioria dos animais e humanos permitindo realizar estudos de emergência, ocorrência e disseminação da resistência aos antibióticos. Este trabalho teve como objectivo a avaliar a resistência antimicrobiana, identificar e avaliar o tipo de Tn1546, comparar os mecanismos e complexos clonais detectados com as estirpes mais prevalentes a nível clínico, bem como detectar a presença de genes de virulência em enterococos isolados de amostras fecais de douradas (Sparus aurata). Um total de 118 amostras fecais de douradas foram semeadas em placas de Slanetz-Bartley (suplementado e não suplementado com vancomicina). Testou-se a susceptibilidade aos antibióticos pelo método da difusão de disco de acordo com as normas do CLSI, usando-se 11 antibióticos: vancomicina, teicoplanina, ampicilina, cloranfenicol, tetraciclina, eritromicina, quinupristina-dalfopristina, ciprofloxacina e aminoglicósidos de elevada carga (estreptomicina, gentamicina, canamicina). Os genes que codificam resistência antimicrobiana e virulência foram estudados pela reacção em cadeia pela polimerase. As espécies Enterococcus faecium e Enterococcus faecalis resistentes à vancomicina foram caracterizados por técnica “Multilocus Sequence Typing”. VRE, com um mecanismo de resistência adquirida (genótipo vanA) foram detectados em 5.6% dos isolados analisados (E. faecalis, E. faecium e E. durans). A maioria dos isolados com genótipo vanA apresentou resistência à eritromicina e todos demonstraram a presença do gene erm(B). Os genes tet(L) e/ou tet(M), aph(3!)- IIIa, aac(6!)-aph(2") e ant(6)-Ia foram identificados nos isolados vanA resistentes aos antibióticos tetraciclina, canamicina, gentamicina e estreptomicina, respectivamente. Todos os isolados vanA apresentaram a estrutura tipo do Tn1546, sem inserções nem deleções, excepto um isolado que apresentou a inserção ISEf1 no espaço intergénico vanX-vanY. As sequências tipos ST273, ST313 e ST76 foram detectados em três E. faecium vanA e ST6 foi identificado nos dois isolados E. faecalis vanA. Nenhum dos VRE isolados apresentou genes de virulência. O estudo da resistência antimicrobiana dos 73 enterococos (6 E. faecalis e 67 E. faecium), isolados a partir de meios não suplementados com antibiótico, permitiu detectar elevadas percentagens de resistência à eritromicina, tetraciclina e quinupristinadalfopristina (58.90%, 17.81% e 13.70%, respectivamente). Os genes erm(B), tet(L) e/ou tet(M), aph(3!)- IIIa e aac(6!)-aph(2") foram demonstrados nos isolados resistentes à eritromicina, tetraciclina, canamicina e estreptomicina, respectivamente. As douradas, embora sendo consideradas peixes de águas limpas, podem constituir um reservatório de enterococos com genótipos de multiresistência aos antibióticos revelando um problema de saúde pública. Os dados obtidos neste estudo são importantes para estabelecer políticas de uso prudente de antibióticos em animais e humanos, bem com, advertir a população humana para os riscos do uso inadequado destes agentes.