Produção e purificação de anticorpos utilizando sistemas aquosos bifásicos constituídos por líquidos iónicos como adjuvantes

• Autor(a) principal: Capela, Emanuel Augusto Vieira
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/16747
• topic: Métodos biomoleculares; Medicamentos; Anticorpos monoclonais; Imunoglobulinas; Purificação; Cultura de células; Sistemas aquosos bifásicos; Soluções iónicas

Atualmente, os anticorpos monoclonais (mAbs) apresentam-se como a classe prevalente de proteínas recombinantes terapêuticas para o tratamento de diversas doenças, incluindo o cancro (ex: cancro da mama, leucemia e cancro da próstata), doenças autoimunes (artrite reumatoide e doença de Crohn), asma e doenças cardiovasculares e infeciosas. Embora o processamento a montante de mAbs, e em particular da imunoglobulina G (IgG), tenha vindo a melhorar consideravelmente ao longo dos últimos anos, o processamento a jusante não tem progredido a esse mesmo ritmo, sendo atualmente considerado a etapa limitante da produção de IgG. A plataforma estabelecida para a sua purificação compreende uma etapa primária de captura do anticorpo através de cromatografia de afinidade com proteína A, seguido de duas etapas cromatográficas subsequentes de purificação. Apesar de este ser o método predileto da indústria, existem limitações atuais decorrentes da utilização de cromatografia, nomeadamente os elevados custos associados ao processo e ainda limitações intrínsecas ao próprio ligando. Neste sentido, os sistemas aquosos bifásicos (SAB) apresentam-se como uma valiosa alternativa não-cromatográfica, permitindo a redução de custos e do número de etapas envolvidas no processo, comparativamente aos métodos convencionais. No entanto, os SAB tradicionais constituídos maioritariamente por sais e/ou polímeros têm-se mostrado pouco seletivos, resultando em baixos rendimentos e fatores de purificação. Por outro lado, os líquidos iónicos (LIs) são uma nova classe de solventes que permitem manipular a polaridade e afinidade das fases coexistentes através de uma escolha adequada da sua estrutura química. Apesar desta possibilidade, a sua aplicação na formação de SAB para a extração e purificação de IgG ainda não foi reportada na literatura. Assim sendo, neste trabalho estudaram-se vários LIs como adjuvantes, em várias concentrações, em SAB convencionais PEG/Fosfato e PEG/Dextrano, para a extração seletiva e posterior purificação de IgG diretamente de sobrenadantes de linhas celulares desenvolvidas a partir de ovário de hamster chinês (CHO). De acordo com os resultados obtidos, é possível constatar que a presença de LIs como adjuvantes permite manipular a polaridade e afinidade das fases coexistentes dos SAB, aumentando o seu potencial de extração para a IgG. Mais ainda, o sistema constituído por PEG 3350 + dextrano 500 kDa + H2O + 20% [C4mim]Br demonstrou-se extremamente promissor para a extração seletiva e posterior purificação de IgG, possibilitando a extração de IgG para a fase rica em PEG com um rendimento de 82% e com um grau de pureza de 64% em apenas uma etapa. Neste contexto, foi assim desenvolvida uma nova plataforma de extração e purificação de IgG diretamente a partir de sobrenadantes de culturas celulares CHO, sendo previsível a sua aplicação a larga escala.