Purificação de IgY e avaliação da sua atividade/estabilidade em soluções aquosas de polímeros, sais e líquidos iónicos

• Autor(a) principal: Calheiros, Juliana Meixedo
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/21213
• topic: Sistemas aquosos bifásicos; Bioquímica clínica; Imunoglobulinas; Soluções iónicas

O aumento da resistência a antibióticos exige atualmente um maior esforço no desenvolvimento de terapêuticas alternativas. Os biofármacos com base em anticorpos, reconhecidos pela sua especificidade, constituem uma alternativa promissora no tratamento de infeções, bem como de cancro, alergias, doenças auto-imunes e inflamação. A imunoglobulina Y (IgY) da gema do ovo apresenta diversas vantagens relativamente à IgG de mamíferos, sendo aplicada em imunoterapia passiva, imunoprofilaxia, diagnóstico e métodos imunológicos. No entanto, as técnicas tradicionais de extração da IgY a partir da matriz lipídica que é a gema de ovo não são adequadas para a sua obtenção em grandes quantidades e com um elevado grau de pureza de um modo económico e rápido. Uma vez que a indústria farmacêutica exige que as proteínas terapêuticas apresentem um elevado grau de pureza, é necessário desenvolver novos processos eficazes e económicos que permitam a extração e purificação da IgY. Os sistemas aquosos bifásicos (SABs) são sistemas do tipo líquido-líquido utilizados na extração e purificação de biomoléculas. São sistemas maioritariamente constituídos por água, biocompatíveis e têm a capacidade de preservar a integridade e atividade biológica das proteínas. Na inexistência de uma técnica ideal de extração e purificação da IgY, a utilização de SABs poderá responder a esta problemática; contudo deverá avaliar-se a preservação da funcionalidade do anticorpo após o processo. Face ao exposto, o objetivo desta dissertação de mestrado consiste em extrair e purificar a IgY num único passo utilizando SABs constituídos por líquidos iónicos (LIs) e polipropileno glicol 400 g.mol-1 (PPG 400). Adicionalmente, pretende-se avaliar a atividade e estabilidade da IgY em várias soluções aquosas de polímeros, sais e LIs para verificar se a técnica de purificação não compromete a funcionalidade do anticorpo. Verificou-se que as proteínas presentes na gema de ovo apresentam uma maior afinidade para as fases enriquecidas em LIs, em detrimento das fases de PPG 400. Após optimização de várias condições, conseguiu-se alcançar uma recuperação máxima de 85 % da IgY na fase inferior dos sistemas (enriquecida em LI) com 44 % de pureza, num único passo. Relativamente à atividade e estabilidade do anticorpo em soluções aquosas de polímeros, sais e LIs não se verificaram alterações ao nível da estrutura secundária, embora possam ocorrer algumas modificações na reatividade da IgY na presença destas soluções.