Aplicação de anticorpos recombinantes para o diagnóstico da Pneumocistose

• Autor(a) principal: RIBEIRO, Marta Maria Ramos Soares
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/19006
• topic: Ciências biomédicas; Saúde pública; Diagnóstico; Terapêutica; Pneumocystis jirovecii.; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

A pneumonia causada por Pneumocystis, conhecida por pneumocistose, ou PPc, é uma doença de alto relevo e preocupação a nível de saúde pública. O seu rápido diagnóstico é de grande importância, visto ser uma doença fatal em indivíduos com imunossupressão. Como tal, é imprescindível a continuação da pesquisa de novas abordagens de diagnóstico rápido para esta doença. A aplicação de anticorpos recombinantes adquiridos pela técnica de Phage display pode ser uma grande mais valia, não só do ponto de vista de diagnóstico, não tendo de se recorrer a kits de diagnóstico, como também terapêutico. Este estudo teve por objetivo a produção de fragmentos de anticorpos recombinantes com o auxílio da técnica de Phage display, para diagnóstico da pneumocistose. A fim de se pesquisar os anticorpos recombinantes monoclonais específicos para P. jirovecii foram realizados três estudos. No primeiro e segundo estudos, a pesquisa dos anticorpos recombinantes fez-se através de amostras biológicas aleatórias de lavados broncoalveolares (LBA) de doentes com presença de P. jirovecii. Para o terceiro estudo foi utilizada uma proteína recombinante purificada MsgC - glicoproteína Major de superfície (do inglês, Major surface glycoprotein) de P. jirovecii, a qual é composta por três fragmentos de péptidos imunogénicos. Na captura de fragmentos recombinantes anti- P. jirovecii, utilizaram-se no primeiro estudo três bibliotecas combinatórias de fragmentos de anticorpos recombinantes (scFv – Griffin1., Tomlinson J e I) e apenas uma biblioteca (Griffin 1.) para o segundo e terceiro estudos. No primeiro estudo obtiveram-se partículas fágicas monoclonais cuja presença foi validada com o antigénio MsgC, apresentando sequências com 550 a 750 pb, tamanho expectável para scFv. Na fase de produção de scFv em E. coli HB2151, não houve expressão de scFv, possivelmente, devido à sequência recombinante obtida possuir um codão terminal amber TGA em excesso, o que impossibilita a sua expressão. Para o segundo e terceiro estudos os resultados foram inconclusivos. Com base nos resultados obtidos neste estudo, pode-se assumir que apenas com a utilização de antigénio puro (MsgC recombinante) haverá maior hipótese de se obter scFv para poder utilizar no diagnóstico da pneumonia por Pneumocystis.