Estudo da variabilidade genética de plantas de Thymus micropropagadas por diferentes processos

• Autor(a) principal: Afonso, Natália do Céu Pires
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/5652
• topic: Tomilho (Thymus vulgaris); Micropropagação; Reguladores de crescimento; Variabilidade genética

Thymus é o género bem representado na família das Lamiaceae. Este género inclui mais de 300 espécies em todo o mundo e é amplamente distribuído em zonas temperadas. São pequenos arbustos de 20-50 cm de altura, com flores pequenas, de cor roxo pálido ou branco. Numa população de Thymus, podemos observar a existência de indivíduos femininos e hermafroditas, sendo a planta designada de ginodióica. Tomilho é o nome vulgar para designar as espécies de Thymus, este é cultivado em quase todos os países, como planta aromática essencialmente para fins culinários. Tem sido demonstrado que apresenta propriedades benéficas, tais como: anti-inflamatória, antibacteriano, antifúngico, antiviral, antitumoral, antiprotozoário, antitússico, inseticida, antisséptico e antioxidante. Os óleos essenciais de Thymus vulgaris são muito ricos em fenóis. A quantidade dos óleos essenciais varia consoante o estado vegetativo da planta. Nestas espécies existe muito polimorfismo químico, espécies geograficamente distantes apresentam grande variação na composição química dos seus óleos essenciais. Atualmente existe uma procura excessiva de Thymus na Natureza, perturbando assim os ecossistemas e naturalmente incitando a diminuição de genes, podendo levar a extinção de algumas espécies de Thymus. Para colmatar este problema, surge a aplicação da técnica de micropropagação, esta permite a produção rápida e a grande escala de plantas, livres de microrganismos, podendo assim, selecionar e micropropagar os genótipos mais vantajosos. Neste trabalho foi efetuada a avaliação da variabilidade genética de várias gerações de Thymus vulgaris micropropragados por diferentes metodologias. Os segmentos nodais desta planta foram colocados em meio de cultura MS (Murashige e Skoog) sólido com adição de várias concentrações de BAP (6-benzilaminopurina). O meio MS sem reguladores de crescimento foi considerado como controlo. Os explantes responderam melhor quando colocados em meio MS com 1mg/L de BAP. Relativamente ao enraizamento, só se observou no meio MS sólido livre de reguladores de crescimento. Também foram colocados explantes em meio de cultura MS líquido com 1mg/L BAP, que responderam muito bem, com um elevado número de rebentos mas sem formação de tecido caloso. O tecido caloso só foi possível observar quando se colocaram explantes em meio de cultura sólido com adição de 2 mg/L de 2,4-D (ácido 2,4 diclorofenoxiacético), este meio é apropriado para a indução de calli. Foi avaliada a variabilidade genética de 13 amostras de tecidos, formados pelos diferentes métodos de micropropagação incluindo o tecido caloso, utilizando 8 primers ISSRs (Inter Simple Sequence Repeat). Esta técnica, baseia-se em PCR (reação em cadeia pela polimerase), envolve amplificações de segmentos de DNA (ácido desoxirribonucleico) entre duas regiões idênticas repetidas de microssatélites, a uma distância amplificável, orientadas em direções opostas. Das 13 amostras avaliadas observamos um polimorfismo de 1,60%. Num total de 74 bandas amplificadas apenas uma banda foi polimórfica. Esta banda corresponde ao fragmento de DNA de tamanho 1200 pb, amplificado pelo primer UBC873. Esta banda está presente somente nas amostras de calli. Não se verificou variabilidade genética nas amostras referentes às quatro gerações micropropagadas, incluindo a planta mãe, cultivadas em meio sólido, também não se verificou polimorfismo nas amostras provenientes da micropropagação em meio líquido. Assim, tal como esperamos a micropropagação permitiu a formação de clones com a mesma informação genética.